[发明专利]一种卤素过氧化物酶分离纯化方法无效
| 申请号： | 200710012764.2 | 申请日： | 2007-09-07 |
| 公开（公告）号： | CN101381707A | 公开（公告）日： | 2009-03-11 |
| 发明（设计）人： | 张卫;李海燕;靳艳;虞星炬;金美芳;吴佩春 | 申请（专利权）人： | 中国科学院大连化学物理研究所 |
| 主分类号： | C12N9/08 | 分类号： | C12N9/08 |
| 代理公司： | 沈阳科苑专利商标代理有限公司 | 代理人： | 马 驰;周秀梅 |
| 地址： | 116023*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 卤素 过氧化物 分离 纯化 方法 | ||
1.一种卤素过氧化物酶分离纯化方法，其特征在于：以中国海域养殖江蓠属龙须菜为原料，分离纯化得到电泳纯的卤素过氧化物酶；
具体操作过程如下：
1)清洗并除去龙须菜中的泥沙及其它杂物，控净水分，液氮研磨成粉末；
2)粗提液的制备：加入藻体重量1/5～3/2的0.01～0.1mol/L、pH5～9的Tris-HCl缓冲液，0～10℃，浸泡24～72h，纱布过滤；
3)0～10℃，3000g～8000g离心10～50min，上清液即酶粗提液；
4)硫酸铵分级沉淀：粗提液加固体硫酸铵至最终质量浓度10～30％，0～10℃，6000～15000g离心10～50min；弃沉淀，上清再次加固体硫酸铵至最终质量浓度50～90％，0～10℃，6000～15000g离心10～50min；收集沉淀，离心取沉淀物沉淀，用0.01～0.1mol/L、pH5～9Tris-Cl缓冲液进行透析10～48小时，得到卤素过氧化物酶的粗酶液；透析膜截留分子量为14000；
所述硫酸铵分级沉淀后的粗酶液经一次柱层析，即得电泳纯的卤素过氧化物酶：粗酶液上阴离子交换柱层析分离，用含NaCl浓度从0.05～2.0M变化的0.01～0.1mol/L、pH5～9Tris-HCl缓冲液线性梯度洗脱，粗酶液与洗脱液的体积比为1∶20～40；洗脱组份按1-10分钟的间隔收集，测定每管收集液的酶活及280nm处的吸光值，合并有酶活的组分，即为卤素过氧化物酶。
2.按照权利要求1所述卤素过氧化物酶分离纯化方法，其特征在于：所述阴离子交换树脂为DE-52或DEAE-Sepharose。
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