[发明专利]淡色库蚊细胞色素P450(CYP6F1)基因

说明书

技术领域：本发明属于基因工程领域，涉及一种来自于淡色库蚊溴氰菊酯抗性的细胞色素P450(CYP6F1)基因。

背景技术及发明内容：细胞色素P450单加氧酶是昆虫体内参与各类杀虫剂以及其它外援性和内源性化合物化代谢的主要解毒酶系。细胞色素P450(简称CYP)是细胞色素P450单加氧酶系的末端氧化酶，起着与底物结合以及从NADPH传递电子到NADPH细胞色素P450还原酶的重要作用。细胞色素P450功能多样，特别是能够代谢目前广泛使用的杀虫剂如拟虫菊酯类、氨基甲酸酯类等，其与昆虫抗药性形成机制的研究成为当前研究的热点。近些年来，随着分子生物学及其技术的发展，克隆昆虫P450基因、研究其系统进化以及与抗药性的关系越来越引起重视。昆虫细胞色素P450与诸多杀虫剂，尤其目前广泛使用的拟除虫菊酯类杀虫剂的抗性密切相关。目前，在众多已知的昆虫细胞色素P450家族中，被认为与菊酯类杀虫剂抗性关系最为密切的主要为CYP6家族基因。

本发明所述的淡色库蚊细胞色素P450(CYP6F1)基因是发明人在山东省寄生虫病防治研究所医学昆虫学研究室应用兼并引物，以淡色库蚊溴氰聚酯抗性品系提取的RNA为模板，降落RT-PCR技术克隆扩增，并采用快速末端扩增法克隆获得。序列经拼接获得淡色库蚊细胞色素P450(CYP6F1)基因cDNA全长，为1639bp；其开放阅读框为1527bp，编码508个氨基酸。在NCBI网站上用BLAST完成序列同源性分析，表明其为新基因。经半定量RT-PCR和实时定量PCR证实，该基因在淡色库蚊溴氰聚酯抗性品系中高表达。因此，推测淡色库蚊细胞色素P450(CYP6F1)基因可能与淡色库纹溴氰聚酯抗性有关。

由于淡色库蚊细胞色素P450(CYP6F1)基因在GenBank中为新基因，本发明人对该基因的结构和功能研究成果均为开创性的。美国国家生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information，NCBI)已正式接收该基因为GenBank的新成员，接收号为：AY662654。

淡色库蚊细胞色素P450(CYP6F1)基因序列：1639bp

   1 cttatgtttg cgtggataat ctgcgctgcg gcagcagttc cgctggtgta cttcctgatc

  61 gtgtaccagt tcagctactg gaaacgtcgt gggatcacac aactcactcc atcattccca

 121 tttggagatc ttggaccgtt ctttcggcaa cggtccagcc tcggagtggt ctacgccgat

 181 gtgtaccggc tgtgcaagcg cctacccttt gtggggatct acttttcctt gcggccaatg

 241 ctggtggtca acgaccccga gttgattaaa aatgtgcttg tgcgtgattt tgaccacttt

 301 cacgatcgtg gactgtacgt gaacgaggag aaggacccac tcagtgggca tttgtttgca

 361 ctcggtggcg aacagtggcg ccatcatcgg tccaagctaa cgccaacgtt cacctcggga

 421 aggttgaagg agatgttcac gaacttggtc caaattgggc gtgttctcca agatcacgtg

 481 gcgaaacgtg ctggggagga catcgaaatt cgggacgtga tggcgcggta cactaccgat

 541 atcattgcat cggttggatt cggaatcgaa aatgactcca tcaacgaaaa gggcaacatt

 601 ttcagggaaa tgggaacgaa ggtgttctct cctgatctta agacgatact tcgattgacg

 661 agcacatttt tcactccaaa gctgaacgca ctgtttggat tcaaatttat cgcacaggag

 721 attgaagact tcatcatgaa cgttgtacgt gaaaccctgg agtacagaga aagcaacaaa