[发明专利]一种牙鲆仔稚幼鱼性激素水平测定的样品制备方法

权利要求书

1.一种牙鲆仔稚幼鱼性激素水平测定的样品制备方法，其特征在于，具体步骤如下：

1)取活的或-80℃保存的牙鲆仔稚幼鱼，秤量后，全鱼用蒸馏水清洗2～3遍，用剪刀剪碎，置于研钵中；

2)加入PBS缓冲液浸湿，用液氮充分研磨，匀浆液转入离心管中；然后继续加入PBS缓冲液浸湿，重复研磨，使最终加入的PBS缓冲液量为样品体重数值的8～12倍，收集的匀浆液用超声波粉碎20～40秒钟；

3)向匀浆液中加入PBS缓冲液体积1～2倍量的乙醚，翻转混匀，然后在3～5℃下，6000～8000转/分钟离心8～10分钟；

4)收集液相，将固相加入4～6倍体积的PBS缓冲液，再加入PBS缓冲液体积0.5～1倍的乙醚，混匀，在3～5℃下，6000～8000转/分钟离心8～10分钟；收集液相，固相重复本步操作；

5)将液相汇集在一起，颠倒混匀，然后静置分层，置于液氮中冷冻后取有机相；

6)剩余的水相中加入等体积的乙醚，颠倒混匀，静置分层，于液氮中冷冻后取有机相；

7)将有机相汇集，置于通风橱，45～55℃水浴，充分挥发有机相；用PBS缓冲液室温下充分溶解，将溶液储存于-20℃待用；

所述的PBS缓冲液均为磷酸盐缓冲液，含有137mmol/L NaCl，2.7mmol/LKCl，10mmol/L Na₂HPO₄和2mmol/L KH₂PO₄，pH 7.4。

2.按照权利要求1所述的牙鲆仔稚幼鱼性激素水平测定的样品制备方法，其特征在于：步骤(2)中最终加入的PBS缓冲液量，不足1mL的补齐至1mL。