[发明专利]一种高色价红曲米制作方法

权利要求书

1、一种高色价红曲米制作方法，其特征在于：采用9903A菌种通过诱变分离得到两株菌株，两株菌株混合发酵，接种比例为1∶0.8-1∶1.2，通过液体种子发酵的，再通过固体发酵获得红曲米产品。

2、根据权利要求1所述的一种高色价红曲米制作方法，其特征在于：用9903A菌种诱变分离得到两株菌株的方法是：

(1)基础培养基：酵母膏2g，蔗糖2g，麦芽膏10g，KH₂PO₄0.5g，MgSO₄·7H₂O 0.5g，琼脂20g，水1000ml，PH自然，用做斜面和平板培养；

(2)种子培养基：酵母膏4g，葡萄糖20g，麦芽浸膏10g，蛋白胨5g，KH₂PO₄ 0.5g，MgSO₄·7H₂O 0.5g，水1000ml，PH5.4，用于大瓶复发酵时培养种子液；

(3)发酵培养基：蔗糖20g，大米粉20g，玉米粉8g，高粱粉8g，大豆粉5g，蛋白胨5g，CaCO₃ 6g，(NH₄)₂SO₄ 5g，KH₂PO₄ 0.2g，水1000ml，PH5.4；

孢子悬液制备：用10ml无菌水洗下培养成熟的斜面孢子，置于预先灭菌的具玻璃球株和20ml无菌水的250ml三角瓶中，于播床上振荡30-40分钟，至镜检为单孢子；用血球计数计数并用无菌水调节孢子浓度为1×10⁶-10⁷/ml，即成单孢子悬浮液；

诱变路线：

热水处理→紫外诱变→亚硝基胍诱变→热水处理→紫外诱变，诱变后得到诱变菌株1-18：102.12红色价/U·ml^-1，1-21：158.7红色价/U·ml^-1，1-22：109.99红色价/U·ml^-1，1-25：132.65红色价/U·ml^-1，1-33：112.2红色价/U·ml^-1，1-60：122.85红色价/U·ml^-1，1-61：140.36红色价/U·ml^-1，再将诱变菌株进行传代实验，得到1-21和1-61两只菌株。

3、根据权利要求2所述的一种高色价红曲米制作方法，其特征在于：诱变路线中的热水处理是：取单孢子悬液1ml加入装有9ml，PH2.0无菌水的试管中，摇匀，于70℃水浴中处理25分钟，做为紫外诱变的孢子悬液；

紫外诱变：一切操作在避光环境下进行，取上述处理的孢子悬液8ml于直径9cm的带搅拌子平皿中，在诱变箱中提前0.5h开紫外灯磁力搅拌，15W30cm照射一定时间，处理液收集于试管中，冰水浴2h，取诱变处理过的孢子悬液按0.2-0.5ml/皿涂布于加有25-30ml基础培养基琼脂平板上，28℃避光培养2-3d；

亚硝基胍诱变：于通风橱中用称量瓶准确称量NTG，加助溶剂甲酰胺或丙酮少许1-2ml，以1∶9W/V用PH6.0磷酸缓冲液溶解，保存于棕色瓶中，采用混合平板涂菌法，再将稀释好的孢子悬液按0.2ml/皿涂布平板，28℃避光培养3-4d。