[发明专利]吩噻嗪类染料修饰的磁性微粒的制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明是一种净化血液及血液制品的吩噻嗪类染料修饰的磁性微粒，及该吩噻嗪类染料修饰的磁性微粒的制备方法及其用途。

背景技术

输血是治病救人的有效治疗手段，但输血也伴随着艾滋病、乙型肝炎以及丙型肝炎等病毒性疾病传播的危险。据统计，目前全世界被艾滋病毒(HIV)感染的人数大于三千万，被乙肝病毒(HBV)感染的人数大约3.7亿，被丙肝病毒(HCV)感染的人数大约1.8亿，而被HIV感染总数的5-10％源于不安全的输血！

血液中的病毒主要存在于白细胞中，还有一部分游离于血浆之中。由于在一般的输血过程中白细胞没有实际的功效，且易引起发热反应和携带病毒的高风险，所以近年来医学家建议从输血用血液中除掉白细胞。白细胞的分离及过滤技术目前已经非常成熟，通常经过简单的离心和过滤就可除去血液中99.99％的白细胞。但该去白过程会部分破坏血液中的正常成分。血浆占全血的55％，血浆的输注在各种血液成分的输注中占有很大的比例。杀灭和去除血浆中的病毒是提高血浆输注安全性亟待解决的问题。

目前，血液及血液制品中所含病毒的处理主要有灭活和去除两种形式。灭活方法中，巴斯德消毒法对一些耐热病毒的灭活效果不佳。有机溶剂结合表面活性剂(S/D)法，对非脂包膜病毒无效，且工艺复杂，成本高。干热灭活法，虽安全有效，但仅适用于冻干制剂的病毒灭活。光化学灭活法，是目前被视为颇有前景的血液净化的热点研究方向，不仅可以灭活血浆中游离的病毒，而且可以灭活细胞内整合的病毒，故可用于全血、血浆及血细胞等各种血液成分及血液制品的消毒。已使用的化学光敏剂主要有血卟啉衍生物、补骨脂素衍生物及吩噻嗪类染料亚甲蓝等。

亚甲蓝光化学法灭活法具有效率高、成本低、起效快、操作简单的优点，灭活后的血浆副作用小，血浆蛋白的免疫原性无变异，主要用于血浆中HIV、HBV及HCV的灭活；且亚甲蓝是FDA批准的临床用药，毒副作用较小。对亚甲蓝光化学法作用机理的研究表明，亚甲蓝既可与病毒脂包膜上的脂质和蛋白质结合，又可与核酸，尤其是富含GC碱基区域结合，经一定波长的光照后，光敏剂形成单态氧和氢氧自由基，破坏了病毒脂包膜，使得鸟嘌呤发生氧化，核酸发生断裂，从而可阻止病毒的复制。该方法目前主要用于新鲜冰冻血浆中病毒的净化，而其它的一些对核酸具有更高亲和力并可杀灭细胞内病毒的亚甲蓝衍生物已用于全血及红细胞悬液中病毒的灭活研究。1993年起在欧洲一些国家的红十字会输血中心开始使用该方法灭活新鲜冷冻血浆中的病毒，至今未发现明显的负面反应。我国近年来也将采用该法灭活的血浆用于临床治疗，取得了良好的效果。但该法主要的缺点是：亚甲蓝残留在血液中，导致血液颜色变化，会使受血者产生心理抗拒。尤其是残留的亚甲蓝在人体内会积累，存在潜在的致突变的危险。虽然可以用吸附剂法去除亚甲蓝，但去除率通常只能达到85％左右，且该过程会影响血液制品中的正常成分。上述灭活病毒的方法，均无法将灭活后的病毒从血液或血液制品中去除。临床使用表明，没有一种病毒灭活方法能保证血液制品绝对无传播病毒的危险。

比较成熟的病毒去除方法中：色谱法耗时太长，且去除病毒不彻底。膜法易损伤细胞成分。免疫吸附柱法尚处于研发之中，可用于血液制品中病毒的彻底去除，但耗时较长且特异性太强，故实际应用的范围很窄。

申请号为200410026221.2的中国专利，公开了一种将抗体固定于磁性微粒表面，利用抗原抗体间的特异性结合及磁性微粒的磁性分离性能去除血液中病毒的方法。但由于抗体的稳定性较差，产品不易保存，故实际应用受到很大限制。

综上所述，现存的血液净化方法，有的只能杀灭病毒而无法去除被杀灭的病毒，致使异源蛋白/核酸虽无活性但依然存在于血液或血液制品中，而这种存在本身就有潜在的危险；有的虽能去除病毒，但无法确保病毒被完全去除。

磁性微粒是由有机或无机基质与磁性金属、金属氧化物等磁性超细粉末复合形成的纳米或微米级胶态颗粒。该材料的超顺磁性使其在胶体溶液中具有稳定性，其磁响应性可保证在外加磁场中颗粒与悬浮介质的分离，在撤去外磁场时微粒本身会重新悬浮分散而不聚集，即不具有磁记忆性。更有意义的是，通过高分子或有机试剂与磁性颗粒的复合，可在颗粒表面引入氨基、羧基、巯基、羟基等功能基团，通过共价作用将酶、抗体、细胞、核酸及寡核苷酸等生物分子固定在表面，可应用于细胞分选、酶的固定化、免疫检测、药物载体及核酸的纯化与分离、肿瘤的靶向治疗研究等生物、医学领域。