[发明专利]抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药基因的反义核酸

说明书

技术领域

本发明涉及一类针对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)耐药基因mecR1/mecA和blaR1/blaZ的反义核酸序列及其制备含有该反义核酸序列的药物及其用途。

背景技术

目前细菌耐药问题在全球范围内已经愈演愈烈，许多曾经可以治愈的细菌感染性疾病正在成为难以治愈的疾病。MRSA是医院内感染和社区感染的重要致病菌，自1961年首次发现MRSA以来，特别是80年代后，MRSA感染率在大部分地区均呈明显上升趋势，如在美国MRSA的感染率从1974年的2％增至2003年的接近60％，30年来几乎增加了30倍；意大利从1981年的6％上升到1996的26％。随着MRSA感染率的不断提升，其致死率也迅速上升，英国统计资料显示，1993年至2002年间MRSA致死率提高了15倍，一旦全身感染其致死率高达50％以上。MRSA具有多药耐药性，它不仅对几乎所有β-内酰胺类抗生素耐药，而且对头孢菌素类、氨基糖甙类、四环素类、大环内酯类、氟喹喏酮类、磺胺类等多种抗生素耐药，因此使很多临床上有效的抗生素失效，大大限制了医生们的用药，除了糖肽类的万古霉素和考拉替宁外几乎无药可用。但1996年日本报道了第一例对万古霉素敏感性下降的MRSA(MIC＝8μg/ml)，当时就有专家预言VRSA的出现只是一个时间上的问题，不出所料2002年6月美国公布了第一例VRSA(万古霉素MIC＝128μg/ml)。尽管现在VRSA的检出率仍不高，但它的出现必将为MRSA的治疗带来更大的困难，应受到高度重视，以防有朝一日使MRSA的治疗面临无药可用的境地。因此，寻找有效对抗MRSA耐药性的药物作用新靶点及药物成为研究者们关注的焦点之一。

金黄色葡萄球菌产生耐药性的机制主要有以下两种：1.生成β-内酰胺酶，使β-内酰胺环裂开导致β-内酰胺类抗生素水解失活，β-内酰胺酶由基因blaZ编码；2.生成新的青霉素结合蛋白2a(PBP2a)，细菌的细胞壁上存在着粘肽合成酶即青霉素结合蛋白(PBPs)，PBPs是β-内酰胺类抗生素的作用靶点。MSSA有5种PBPs，分别为PBP1(87KDa)，PBP2(80Kda)，PBP3(75Kda)，PBP3′(70Kda)及PBP4(41Kda)，而MRSA比MSSA多产生了一种78KDa的PBP2a，PBP2a的功能相当于MSSA全部主要PBPs的功能，并且与β-内酰胺类抗生素亲和力极低，在此类抗生素存在的情况下仍能完成细菌细胞壁的合成，而失去对β-内酰胺类抗生素的敏感性。表达PBP2a的结构基因是mecA。调控MRSA耐药基因表达的信号通路已被揭示，其中两类基因(BlaZ和mceA)及其表达产物参与了金黄色葡萄球菌耐药性的产生。blaZ和mceA的表达受到感受器/传感器蛋白BlaR1、MecR1及与其相耦联的抑制蛋白Blal、Mecl的调控。BlaR1和MecR1具有同源性，均为跨膜蛋白，它们胞外部分为感受器结构域，含有青霉素结合模序。细胞内为传感器结构域，该序列具有裂解Blal及Mecl的功能。当诱导剂β-内酰胺类抗生素结合到BlaR1的感受器结构域，BlaR1被激活，其转换器结构域内的锌金属蛋白酶序列裂解Blal，使Blal从BlaZ的启动子区域解离，去除对BlaZ的阻遏作用，导致了BlaZ开始表达。mceA基因的表达由相似的感受器/转换器蛋白和阻遏系统调控。调控基因blaR1和mecR1在耐药基因BlaZ和mceA的表达中发挥着至关重要的作用。