[发明专利]厌氧菌菌株的连续培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种厌氧菌菌株的连续培养方法，尤其是采用聚乙烯醇复合凝胶作为包埋材料连续培养己酸菌的方法。

背景技术

厌氧菌在有氧的情况下不能生长，要培养厌氧菌，必须创造一个无氧的环境。通常采用在培养基中加入还原剂，或用物理、化学方法去除环境中的游离氧，以降低氧化还原电势。如硫基乙酸钠培养基，牛心脑浸液培养基等。常用的厌氧培养方法有厌氧缸法、厌氧袋、厌氧箱、生物耗氧法等，可根据实际情况选用。

近年来，人工老窖泥的培养技术虽日臻成熟，但总体来看，经过人工培养的发酵池在短时间内是达不到优质高产的效果。其主要原因有微生物驯化、增长速度慢，有益微生物数目较低。

发明内容

本发明目的是提供一种采用聚乙烯醇复合凝胶作为包埋材料的厌氧菌菌株的连续培养方法。

本发明它包括下列步骤：

a)、混合在厌氧箱中将5～15mL己酸菌菌悬浮液加入到90mL聚乙烯醇复合凝胶溶液中，搅拌均匀后倒入培养皿中铺成平板；其中己酸菌菌悬浮液的用量优选为10mL，己酸菌菌悬浮液包埋量为10mL。

b)、冷冻、切块在-20℃下冷冻处理48h，成型后取出切成块状，外形尺寸为：12mm×10mm×12mm；

c)、培养然后在乙酸钠培养基中进行培养，培养温度为37℃。

本发明是采用固定化细胞原理对厌氧菌己酸菌经过包埋，主要利用己酸菌被固定在凝胶中形成相对厌氧的环境，达到厌氧培养的效果。同时，在培养的过程中固定化己酸菌载体沉积于容器底部或悬浮于液体中，起到隔离氧的作用；并且其抗杂菌能力增强，可实现连续培养、操作简单，具有明显“增己降乳”的作用。适合于粗放的工业化大生产。

具体实施方式

下面的实施例可以使本专业技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。

实施例1

固定化细胞的载体——聚乙烯醇(PVA)复合凝胶的合成方法如下：将9克聚乙烯醇缓慢溶解到100毫升85℃～95℃的热水中，边加边搅拌，待聚乙烯醇完全溶解后，加入4毫升的丙三醇，搅拌均匀，然后在不断搅拌的同时加入已溶解好的1克的硼砂(用1∶1的热水溶解)，边加边搅拌，进行凝胶化处理，交联时间为2～15分钟，然后缓慢地加入1克的顺丁烯二酸酐(用1∶1的热水溶解)，不断搅拌，直至凝胶溶液中无絮状凝固物为止，所得透明、略带乳白色的粘稠溶胶，即为聚乙烯醇复合凝胶。

在厌氧箱中将10mL己酸菌菌悬浮液加入到90mL上述聚乙烯醇复合凝胶溶液中，搅拌均匀后倒入培养皿中铺成平板，其中己酸菌菌悬浮液包埋量为10mL。然后在-20℃下冷冻处理48h，成型后取出切成块状，外形尺寸为：12mm×10mm×12mm，然后在乙酸钠培养基中进行培养，温度为37℃。增殖液中己酸菌菌数达到1.5×10⁹个/mL，产酸度达到0.6g/100mL。

实施例2

重复实施例1，有以下不同点：在厌氧箱中将5mL己酸菌菌悬浮液加入到复合凝胶溶液中，制成固定化己酸菌，然后在乙酸钠培养基中进行培养，温度为37℃。增殖液中己酸菌菌数达到0.8×10⁹个/mL，产酸度达到0.1g/100mL。

实施例3

重复实施例1，有以下不同点：在厌氧箱中将15mL己酸菌菌悬浮液加入到上述复合凝胶溶液中，制成固定化己酸菌，然后在乙酸钠培养基中进行培养，温度为37℃。增殖液中己酸菌菌数达到1.2×10⁹个/mL，产酸度达到0.46g/100mL。