[发明专利]一种植物乳杆菌发酵制备富含共轭亚油酸豆粕饲料的方法

说明书

技术领域

本发明属微生物和动物营养与饲料技术领域，具体涉及一种高产共轭亚油酸(CLA，Conjugated linoleic acid)的新菌株及利用其发酵生产富含CLA的功能性豆粕饲料。 

背景技术

利用乳酸菌发酵豆粕国内已有研究，但利用产CLA的乳酸菌发酵豆粕尚未报道。CLA具有抗癌、促进生长、抑制脂肪累积、增强机体免疫能力等功能，能提高猪、禽生长速度和瘦肉率，是当前药物、保健食品和动物营养等学科的研究热点。牛奶和牛肉、羊肉是人类最主要的CLA天然来源。人们通过二种日粮营养调控途径来提高反刍动物奶、肉中CLA含量：一是日粮添加油脂或改变日粮脂肪来源，以增加瘤胃中CLA代谢底物亚油酸的含量，进而提高畜产品中CLA含量；二是直接添加CLA或瘤胃保护CLA(即过瘤胃CLA)。但由于CLA价格昂贵，饲料中添加成本过高，生产实践中应用不多。因此，动物营养与饲料学家正在寻求其它提高畜产品中CLA含量的适用、低成本方法。 

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：旨在克服上述直接添加共轭亚油酸和改变日粮脂质结构的不足，提供一种能够高产共轭亚油酸的植物乳杆菌新菌株及利用其发酵制备富含共轭亚油酸豆粕饲料的方法，以提高反刍动物日粮中共轭亚油酸的含量。 

本发明的植物乳杆菌新菌株系从自玉米青贮中分离、筛选、纯化和培育出来，命名为植物乳杆菌ANCLA01(Lactobacillus plantarum ANCLA01)。 

该植物乳杆菌发酵制备富含共轭亚油酸豆粕饲料的方法是：先将该高产共轭亚油酸的菌株ANCLA01批量扩培后，再将豆粕去杂粉碎后，在豆粕粉中添加麸皮、碳水化合物、酵母、磷盐、食盐、镁盐，植物油脂和水， 混合搅拌均匀消毒灭菌后，将植物乳杆菌ANCLA01或植物乳杆菌ANCLA01菌株培养液接种到豆粕中，控温发酵。 

附图说明

图1为本发明的植物乳杆菌ANCLAO1在显微镜下拍摄的照片； 

图2为本发明的植物乳杆菌ANCLAO1菌株PCR扩增条带照片； 

图3为不同菌株生物转化共轭亚油酸的能力； 

图4为植物乳杆菌ANCLAO1对发酵底物中碳水化合物的利用。 

本发明的植物乳杆菌ANCLAO1(Lactobacillus plantarum ANCLAO1)已按规定进行了保藏：保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称为CGMCC；地址：中国.北京.中关村，中国科学院微生物研究所；保藏日期：2007年1月8日；保藏登记入册的编号CGMCCNo.1906。 

具体实施方式：

具体实施方式：材料与方法 

1.1材料：玉米青贮采集于合肥市白帝乳业发展公司；培养基：pH6.5—6.8，MRS肉汤培养基，PY培养基，MRS固体培养基、MRS半固体培养基、MRS液体培养基和补添0.1g(100ml)^-1LA的MRS液体培养基。培养基用前均于121℃高压蒸汽下灭菌20min。 

1.2主要试剂：LA和CLA：纯度≥99％，购自Sigma公司；细菌基因组DNA提取试剂盒、PCR试剂盒和胶回收试剂盒，购自宝生物工程(大连)有限公司；其它试剂均为分析纯。 

1.3菌种筛选： 

1.3.1初筛：采集青贮后立即选取感官指标较好的青贮枝叶浸入37℃双蒸水中，十分钟后去除枝叶，吸取新鲜均匀浸泡液10mL加到500mL装有300mL MRS肉汤培养基的三角烧瓶中。37℃静止增菌96h后，稀释涂布平板法倾倒MRS琼脂平板，四区划线后于37℃厌氧培养48h，挑取单菌落穿刺接种于MRS半固体培养基中，37℃培养后防于冰箱保存。 

1.3.2复筛：将初筛保存菌种于37℃活化后，按5％的接种量接种于装有10mL MRS液体培养基的带螺帽试管(d18mmx160mm)中，其中MRS液体培养基中亚油酸含量为0.1g(100mL)^-1。N²驱除空气，厌氧发酵24h 后测定CLA，以筛选出产CLA细菌。