[发明专利]表达新城疫病毒F基因的重组鸡痘病毒活载体疫苗rFPV-1218NDF及其构建方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种表达新城疫病毒F基因的重组鸡痘病毒活载体疫苗的构建领域。

背景技术

鸡痘病毒(Fowlpox Virus，简称FPV)是继痘苗病毒VV之后的一种具有独特优越性和广阔应用前景的表达载体，是当今分子生物学领域的研究热点之一。禽痘病毒属痘病毒科，禽痘病毒属，鸡痘病毒是其代表种。FPV做为表达载体有其独特的优越性。其基因组庞大，长度约为VV的1.5倍，含较多的复制非必需区，可构建FPV多价和多联疫苗；FPV具有自身的酶系统和调控信号，其转录、翻译和装配均发生在胞浆中，可对外源基因的表达产物进行翻译后加工、修饰，保留其相应的生物学活性，诱导机体产生体液免疫和细胞免疫；与VV相比，FPV的宿主范围较窄，仅感染禽类，不易散毒，对哺乳动物和人类无潜在的威胁；重组病毒的构建方法相对简单；表达水平较高；便于对重组鸡痘病毒免疫鸡群和自然感染鸡群进行鉴别。

近十几年来，FPV载体疫苗的研究已取得了很大进展，有多种病原体的保护性抗原基因在FPV中得以成功表达，如：MDV的gB/pp38基因、NDV的F和HN基因、IBDV的VP2/VP2-3-4基因、AIV的HA/NA/NP基因、IBV的S1基因、ALV的env基因、REV的env基因等，并在SPF鸡上有很高甚至100％的保护率(Boyle D B，Heine H G. Recombinant fowlpox virus vaccines for poultry.Immunol.Cell Biol，1993，71：391-397.)。但迄今为止，重组FPV活载体疫苗在国内外尚未获得广泛应用。究其原因，主要是重组FPV疫苗的免疫效力在很大程度上受到商品鸡所携带的母源抗体的干扰。我国商业鸡群携带母源抗体的情况更为严重，因为在我国的养禽业中，种鸡一般要多次接种针对NDV、AIV等病原体的疫苗，包括能产生高抗体滴度的油乳剂灭活疫苗。因此，我国市场上的商品鸡普遍带有相当高的母源抗体，其中ND的母源抗体HI效价平均可达2⁸-2⁹，这无疑给疫苗，尤其弱毒苗和活载体疫苗的早期应用和疫情监测带来很大的困难。重组FPV受到针对FPV的母源抗体和针对外源基因表达产物的母源抗体的双重干扰，而且针对外源蛋白的母源抗体也会干扰其免疫效力。

许多研究已经证明，针对外源蛋白的母源抗体会干扰重组FPV的免疫效力，而且母源抗体越高干扰越大。Taylor等发现，在有较高ND母源抗体的试验鸡上，共表达NDV F和HN基因的重组FPV抵抗NDV强毒攻击的免疫保护率较在SPF鸡上有所下降(Taylor J，Christensen L，Gettig R，et al.Efficacy of arecombinant fowl pox-based Newcastle disease virus vaccine candidate againstvelogenic and respiratory challenge.Avian Dis，1996，40：173-80.)。本室丁炜东、韦栋平等的试验结果也表明，重组FPV的免疫效力因存在针对NDV或AIV的母源抗体而受到很大的影响(丁炜东，曹丽萍，张体银等.表达新城疫病毒F和HN基因重组鸡痘病毒疫苗的遗传稳定性和免疫效力试验.中国兽医杂志，2005，41：10-14.韦栋平，刘玉良，邵卫星等.共表达新城疫F基因和H9亚型禽流感病毒HA基因的重组鸡痘病毒.微生物学报，2004，44：14-18.)。