[发明专利]二氧化碳诊断/测定试剂盒及二氧化碳浓度测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种二氧化碳诊断/测定试剂盒，同时本发明还涉及测定二氧化碳浓度的方法，属于医学/食品/环境检验测定技术领域。

背景技术

血液内二氧化碳的含量对人体内酸碱平衡的调节起着重要的作用。血液pH的恒定是维持生命活动必不可少的条件，血浆中的多种缓冲系统中以碳酸氢盐缓冲系统最为重要，直接影响血液的pH。

血液内二氧化碳的含量变化主要反映代谢性酸碱平衡紊乱。单纯代谢性酸或碱中毒时，血液碳酸氢根[HCO₃^-]下降或升高，总二氧化碳也随之下降或升高。而单纯呼吸性酸或碱中毒时，血液碳酸氢根升高或下降。

总二氧化碳和碳酸氢根的测定方法较可分为直接测定和间接推算两类。直接测定主要有量气法、量压法、滴定法、比色法、Conway微量扩散法、流动注射气体扩散法等。间接推算是利用血气分析仪测得的PH与PCO₂，根据H-H方程的变换形式：

HCO₃^-(m mol/L)＝0.03×PCO₂(mm Hg)×antilog(PH-p ka)或

HCO₃^-(m mol/L)＝0.225×PCO₂(k Pa)×antilog(PH-p Ka)

计算获得。

式中：PH为37℃时测得值，p ka在37℃为6.10。

目前，以间接推算法应用较普遍，由血液分析仪的微处理计算机并与血气分析结果一起报告，准确性基本可以符合临床要求。

直接测定法以滴定法应用最广泛，但由于受多种因素影响，测定误差较大。

酶法测定适合自动化分析，结果可靠，应当是很有前途的测定方法，但目前尚有待深入研究。

检索中国专利发现，申请号为96190276.0、申请日为1996.02.06的发明专利申请公开了一种用来导出病人血液中气体含量的非侵入性的系统和方法。该系统相应于体积测量呼气中的二氧化碳浓度。然后处理该数据导出动脉血中二氧化碳气体水平。若数据为时间域，处理可将时间域数据转换成体积域。该方法也经迭代评估了多个变量的显著性，所得的关系可供快速和准确地对健康人和患肺病病人进行血中气体含量的测定。近年来，申请号为02282386.7、申请日为2002.10.29的实用新型专利公开了一种医用的血液碳酸氢根测定仪，主要由操作面板、进样检测机构、定滴加液机构、搅拌机构和以单片机为主控元件的电器控制部分组成。其操作面板包括有手动按键、输入键盘和显示屏；进样检测机构由沿圆周均布样本孔且在孔内放置样本瓶的样本转盘和竖直装配在转盘下面的驱动电机及对应于检测位样本孔设置的光电检测器组成；定滴加液机构由配置电机的微量泵和设置于样本孔上方的定滴头及配置在定滴头滴液口处的计滴器组成；搅拌机构由设置在样本转盘下方相应位置的搅拌电机和装配在搅拌电机轴上的磁盘及放置于样本瓶内的搅拌棒组成。

以上专利均与酶法测定无关，这从一个侧面说明，国内此方面的实验研究十分缺乏。

发明内容

本发明要解决的技术问题是：提出一种利用酶比色法(EnzymaticColorimetric Method)及酶(偶)联法(Couple Reaction)技术，监测还原型烟酰胺辅酶(还原型辅酶)在340nm波长处吸光度的变化，得以测定二氧化碳浓度的方法，同时，本发明还将给出用以实现该方法的二氧化碳诊断/测定试剂盒，采用该试剂不仅可以在紫外/可见光分析仪或半、全自动生化分析仪上进行二氧化碳浓度测定，而且测定速度快、准确度高，因而可以得到切实的推广应用。

本发明二氧化碳浓度测定方法原理如下：

二氧化碳+过氧化氢+乙酰辅酶A  丙酮酶氧化酶  丙酮酸+辅酶A+氧丙酮酸+L-精氨酸+还原型辅酶  章鱼碱脱氢酶  N2-(D-羧乙基)-精氨酸+辅酶+水