[发明专利]甲酸诊断/测定试剂盒及甲酸的浓度测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种甲酸诊断/测定试剂盒，同时本发明还涉及测定甲酸浓度的方法，属于医学/食品/环境/工业检验测定技术领域。

背景技术

甲酸(HCOOH)在室温下有自然分解的特性，同时，测试过程中不可避免地有一部分水分混入甲酸，甲酸是无色透明和发烟的液体.有浓烈的刺激性酸味。一般在工业及环境监测中使用气相色谱法；在医药及农业上使用酶法分析，酶法分析已被多个国际权威组织或机构采纳：如IFU(国际果汁生产者协会)，AIJN(欧盟果蔬汁及饮料生产者联盟)，及MEBAK，OICC，VDLUFA等组织广为推崇，并确定为标准检测方法。

发明内容

本发明要解决的技术问题是：提出一种利用酶比色法(EnzymaticColorimetric Method)技术，计量/连续监测还原型烟酰胺辅酶(还原型辅酶)在340nm波长处吸光度的变化，得以测定甲酸浓度的方法，同时，本发明还将给出用以实现该方法的甲酸诊断/测定试剂盒，采用该试剂不仅可以在紫外/可见光分析仪或半、全自动生化分析仪上进行甲酸浓度测定，而且测定速度快、准确度高，因而可以得到切实的推广应用。

本发明甲酸浓度测定方法原理如下：

甲酸+辅酶甲酸脱氢酶二氧化碳+还原型辅酶

这种方法应用甲酸脱氢酶(Formate dehydrogenase；EC 1.2.1.2；EC1.2.1.43)酶促反应速率比色法/终点法。甲酸脱氢酶酶解甲酸反应产生二氧化碳，同时将辅酶(在340nm处没有吸收峰)还原成为还原型辅酶(在340nm处有吸收峰)，从而得以测定还原型辅酶在340nm处吸光度上升的程度/速度，通过测量340nm处吸光度上升的程度/速度，可以测算甲酸的浓度大小。

实验表明，从测定结果的准确性和配制成本的经济性两方面综合考虑，无论是单剂、双剂还是三剂，如下成分关系的本发明甲酸诊断/测定试剂盒较为理想：

缓冲液                        100mmol/L

稳定剂                        500mmol/L

辅酶                          3mmol/L

甲酸脱氢酶                    12000U/L

本发明的甲酸诊断/测定试剂盒可以是单剂，包括：

缓冲液、稳定剂、辅酶、甲酸脱氢酶。

试剂盒可以是干粉状态，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液体试剂，直接使用。

也可以将上述单剂试剂配成如下双剂试剂：

试剂1

缓冲液、稳定剂、辅酶。

试剂2

缓冲液、稳定剂、甲酸脱氢酶。

辅酶、甲酸脱氢酶在试剂1或试剂2中的位置可以不限。试剂盒可以是干粉状态，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液体试剂，直接使用。

无论是单剂、双剂，本发明测定甲酸浓度的方法，其辅酶可以是NADP⁺、NAD⁺或thio-NAD⁺中的一种。

具体实施方式

下面结合实施例子对本发明作进一步的说明。

实施例一

本实施例的甲酸诊断/测定试剂为单试剂，包括：

三(羧甲基)氨基甲烷-盐酸缓冲液     100mmol/L

稳定剂                            500mmol/L

辅酶                              3mmol/L

甲酸脱氢酶                        12000U/L

试剂全部溶解配好后，分装入瓶，进行冷冻干燥，制成干粉试剂；使用前，加入纯净水，复溶后使用。

在全自动生化分析仪上设定：温度37℃，反应时间10分钟，起始吸光度≤0.1，测试主波长340nm，测试副波长405nm，被测甲酸样品与试剂的体积比例为1/25，反应方向为正反应(上升反应)，延迟时间大约0分钟左右，检测时间5分钟左右。

加入样品和试剂后，使之混合并发生反应，最终将反应物置于生化分析仪下，检测主波长340nm吸光度上升的程度/速度，从而测算出甲酸的浓度大小。

实施例二

本实施例的甲酸诊断/测定试剂为双试剂，包括：

试剂1

三(羧甲基)氨基甲烷-盐酸缓冲液     100mmol/L