[发明专利]一种纤维堆囊菌及用该菌发酵产福鸽霉素的制备方法及应用

权利要求书

1.一株纤维堆囊菌，其分类命名为纤维堆囊菌(Sorangium cellulosum)MWXAB-125，保藏编号为CGMCC No.2047。

2.一种用权利要求1所述纤维堆囊菌CGMCC No.2047发酵产的抗生素福鸽霉素，其化学命名为1，7，12，13-四羟基-14-甲氧基-8，10-二甲基-6-苯基-5，15-二氧-双环[9.3.1]十五烷-4-酮，分子式为C₂₂H₃₂O₈，结构式为：

3.一种权利要求2所述福鸽霉素的制备方法，其特征是制备步骤为：

A转化培养

(1)发酵种子的制备：将纤维堆囊菌Soce MWXAB-125接种在固体斜面培养基上，30℃培养3～5d后，接种于液体种子培养基中，30℃、160r/min培养3d；

使用的固体斜面培养基配方(g/L)为：

α-纤维素0.5～5.5，安琪活性干酵母1.0～5.0，CaCl₂0.3～3.0，琼脂15.0，去离子水定容至1000mL；

使用的液体种子培养基配方(g/L)为：

马铃薯淀粉0.5～20，葡萄糖0.5～10，酵母粉0.5～10，脱脂奶粉1.0～20，CaCl₂0.3～5.0，MgSO₄·7H₂O0.3～5.0，Fe³⁺-Na-EDTA 0.001～0.2，去离子水定容至1000mL，pH7.0～7.6；

(2)液体发酵：将步骤(1)培养好的种子液，按体积比为3％～20％的接种量接种于含有50mL的发酵培养基的250ml摇瓶中，30℃、160r/min培养5～10d；

使用的液体发酵培养基配方(g/L)为：

马铃薯淀粉0.5～20，葡萄糖0.5～10，酵母粉0.5～10，脱脂奶粉1.0～20，豆饼粉1.0～20，甘油0.5～10，CaCl₂ 0.3～5.0，MgSO₄·7H₂O 0.3～5.0，Fe³⁺-Na-EDTA 0.001～0.2，XAD-16大孔吸附树脂5.0～30，去离子水定容至1000mL，pH7.0～7.6；

B转化产物的粗提

(1)采用离心方法从发酵液中分离、收集树脂，并用2％～10％甲醇水溶液洗涤；

(2)用与发酵液等体积的甲醇淋洗经洗涤的树脂，然后浓缩洗脱液，得到粗提物；

C福鸽霉素的分离纯化

(1)低压层析柱分离：在10μm×25mm×300mm的C-18柱上用10％～100％甲醇均衡梯度洗脱四次，每次淋洗用3个柱体积的淋洗液，分别得到组分I、II、III、IV，每次洗脱时间1～2h；

(2)中压液相分离：合并组分II、III、IV，在15μm×25mm×1000mm的AKTA rpc反相柱上用10％～100％甲醇溶液梯度洗脱：10％～30％甲醇溶液淋洗2个柱体积，35％～65％甲醇溶液淋洗3个柱体积，65％～85％甲醇溶液淋洗2个柱体积，85％～100％甲醇溶液淋洗2个柱体积，100％甲醇平衡1个柱体积，一个梯度循环3～6h，分离、制备，得到组分7F；

(3)高压液相分离：在4.6μm×25mm×250mm的C-18制备柱上对组分7F用50％～70％甲醇溶液恒流分离，得到纯的组分，一个梯度循环5.0～60min。

4.权利要求2所述的福鸽霉素的应用，其特征是用作细胞抑制剂，体外用于抗小鼠黑色素瘤B16、人肝癌细胞Bel 7402、人非小细胞肺癌细胞H 446、人乳腺癌细胞MCF-7和人胃腺癌细胞SGC 7901。

5.福鸽霉素衍生物或类似物，其结构式为

其中：

(1)X＝H，R₁，R₂＝CH₃时的结构即为福鸽霉素；

(2)X＝F，Cl，Br，I，R，RO，RCO，RCOO，OH，RS，SH，NCO，NCS，N₃，氧杂环，氮杂环或芳香基团；

R₁，R₂＝H，F，Cl，Br，I，R，RO，RCO，RCOO，OH，RS，SH，NCO，NCS，N₃，氧杂环，氮杂环或芳香基团。