[发明专利]麦芽糖测定试剂盒及麦芽糖的浓度测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种麦芽糖测定试剂盒，同时本发明还涉及测定麦芽糖浓度的方法，属于食品检验测定技术领域。

背景技术

麦芽糖分子为无色或白色晶体，还原性二糖，有醛基反应，能发生银镜反应，也能与班氏试剂(用硫酸铜、碳酸钠或苛性钠、柠檬酸钠等溶液配制)共热生成砖红色氧化亚铜沉淀。能使溴水褪色，被氧化成麦芽糖酸。用作食品、营养剂等。

发明内容

本发明要解决的技术问题是：提出一种利用酶比色法(EnzymaticColorimetric Method)及酶(偶)联法(Couple Reaction)技术，计量/连续监测还原型烟酰胺辅酶(还原型辅酶)在340nm波长处吸光度的变化，得以测定麦芽糖浓度的方法，同时，本发明还将给出用以实现该方法的麦芽糖测定试剂盒，采用该试剂不仅可以在紫外/可见光分析仪或半、全自动生化分析仪上进行麦芽糖浓度测定，而且测定速度快、准确度高，因而可以得到切实的推广应用。

本发明麦芽糖浓度测定方法原理如下：

麦牙糖+磷酸根  麦芽糖磷酸化酶  葡萄糖+葡萄糖1-磷酸葡萄糖+腺苷三磷酸  己糖激酶  腺苷二磷酸+葡萄糖6磷酸葡萄糖-6-磷酸+辅酶  葡萄糖-6-磷酸脱氢酶  葡糖酸内酯磷酸+还原型辅酶

这种方法应用麦芽糖磷酸化酶(Disaccharide phosphorylases；EC 2.4.1.8)酶(偶)联己糖激酶(hexokinase；EC 2.7.1.1；EC 2.7.1.2)、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(D-glucose-6-phosphate dehydrogenase；EC 1.1.1.49)酶促反应速率比色法/终点法。麦芽糖磷酸化酶酶解麦芽糖反应产生葡萄糖，再通过(偶)联合己糖激酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的作用，最终将辅酶(在340nm处没有吸收峰)还原成为还原型辅酶(在340nm处有吸收峰)，从而得以测定还原型辅酶在340nm处吸光度上升的程度/速度，通过测量340nm处吸光度上升的程度/速度，可以测算麦芽糖的浓度大小。

实验表明，从测定结果的准确性和配制成本的经济性两方面综合考虑，无论是单剂、双剂还是三剂，如下成分关系的本发明麦芽糖测定试剂盒较为理想：

磷酸缓冲液           100mmol/L

稳定剂               500mmol/L

辅酶                 3mmol/L

腺苷三磷酸           20mmol/L

麦芽糖磷酸化酶       10000U/L

己糖激酶             12000U/L

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶  12000U/L

本发明的麦芽糖测定试剂盒可以是单剂，包括：

磷酸缓冲液、稳定剂、辅酶、麦芽糖磷酸化酶、己糖激酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、腺苷三磷酸。

试剂盒可以是干粉状态，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液体试剂，直接使用。

也可以将上述单剂试剂配成如下双剂试剂：

试剂1

磷酸缓冲液、稳定剂、辅酶、腺苷三磷酸。

试剂2

磷酸缓冲液、稳定剂、麦芽糖磷酸化酶、己糖激酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶。

辅酶、麦芽糖磷酸化酶、己糖激酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、腺苷三磷酸在试剂1或试剂2中的位置可以不限。试剂盒可以是干粉状态，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液体试剂，直接使用。

还可以将上述单剂试剂配成如下三剂试剂：

试剂1

磷酸缓冲液、稳定剂、辅酶、腺苷三磷酸。

试剂2

磷酸缓冲液、稳定剂、己糖激酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶。

试剂3

磷酸缓冲液、稳定剂、麦芽糖磷酸化酶。

辅酶、麦芽糖磷酸化酶、己糖激酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、腺苷三磷酸在试剂1、试剂2或试剂3中的位置可以不限。试剂盒可以是干粉状态，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液体试剂，直接使用。

无论是单剂、双剂还是三剂，本发明测定麦芽糖浓度的方法，其辅酶可以是NADP⁺、NAD⁺或thio-NAD⁺中的一种。

具体实施方式