[发明专利]麦芽糖测定试剂盒及麦芽糖浓度测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种麦芽糖测定试剂盒，同时本发明还涉及测定麦芽糖浓度的方法，属于食品检验测定技术领域。

背景技术

麦芽糖分子为无色或白色晶体，还原性二糖，有醛基反应，能发生银镜反应，也能与班氏试剂(用硫酸铜、碳酸钠或苛性钠、柠檬酸钠等溶液配制)共热生成砖红色氧化亚铜沉淀。能使溴水褪色，被氧化成麦芽糖酸。用作食品、营养剂等。

发明内容

本发明要解决的技术问题是：提出一种利用酶比色法(EnzymaticColorimetric Method)及酶联法(Couple Reaction)技术，计量通过酶联反应生成吲嗒胺色原(Indamine dye)或醌亚胺色原(Quioneimine dye)所导致在400-700nm波长处吸光度的上升，得以测定麦芽糖浓度的方法，同时，本发明还将给出用以实现该方法的麦芽糖测定试剂盒，采用该试剂不仅可以在可见光分析仪或半、全自动生化分析仪上进行麦芽糖浓度测定，而且测定速度快、灵敏度大、准确度高，因而可以得到切实的推广应用。

本发明麦芽糖浓度测定方法原理如下：

麦牙糖+磷酸根 麦芽糖磷酸化酶 葡萄糖+葡萄糖1-磷酸

葡萄糖+氧 葡萄糖氧化酶 葡糖酸内酯+过氧化氢

过氧化氢+还原型色原体组合 过氧化物酶 吲嗒胺色原或

醌亚胺色原+水

这个方法应用麦芽糖磷酸化酶(Disaccharide phosphorylases；EC 2.4.1.8)(偶)联葡萄糖氧化酶(glucose oxidase；EC 1.1.3.4)及过氧化物酶(peroxidase；EC 1.11.1.7)酶促反应终点/速率比色法。麦芽糖磷酸化酶酶解麦芽糖反应产生葡萄糖，再通过联合葡萄糖氧化酶的作用，最后生成的过氧化氢在过氧化物酶的作用下，将无色的还原型色原体组合氧化成有色的染料，从而可以通过可见光分析仪器，在400-700nm(根据还原型色原体组合的不同而定)波长处，测定染料-吲嗒胺色原(Indamine dye)或醌亚胺色原(Quioneiminedye)-含量高低的光吸收大小；通过测量400-700nm(根据还原型色原体组合的不同而定)处吸光度上升的程度/速度，得出麦芽糖浓度大小测定结果。

实验表明，从测定结果的准确性和配制成本的经济性两方面综合考虑，如下成分关系的本发明麦芽糖测定试剂盒较为理想：

磷酸缓冲液          100mmol/L

稳定剂              500mmol/L

过氧化物酶          30000U/L

麦芽糖磷酸化酶      10000U/L

葡萄糖氧化酶        12000U/L

还原型色原体组合    0.1-20mmol/L

所述还原型色原体组合(Chromogen)可以是下列28个组合中的任何一个配对组合：

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

石碳酸

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

N-乙基-N-(3-硫丙基)-m-噻啶胺

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

N，N-双乙基-m-甲苯胺

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

2，4-双氯石碳酸

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

2，4，6-仨溴-3-羟基-苯磺酸

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

3，5-双氯石碳酸磺酸

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

3，5-双氯-2-羟基-苯磺酸

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

N-乙基-N-(2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺钠盐

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

仨溴羥基苯甲酸

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

双甲基苯胺

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

N-乙基-N-(2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

2，2’-AZINO-双(3-乙基苯噻唑-6-磺酸)

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

4-羥基-3-甲氧基苯甲酸

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

3-甲基-乙基-羥基苯胺

4-氨基抗砒

石碳酸

4-氨基抗砒

N-乙基-N-(3-硫丙基)-m-噻啶胺

4-氨基抗砒