[发明专利]谷胱甘肽诊断/测定试剂盒及谷胱甘肽的浓度测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种谷胱甘肽诊断/测定试剂盒，同时本发明还涉及测定谷胱甘肽浓度的方法，属于医学/食品检验测定技术领域。

背景技术

谷胱甘肽(GSH)是由谷氨酸半胱氨酸和甘氨酸通过肽键缩合而成的三肽化合物。谷胱甘肽的主要生理功能是抗自由基，抗衰老，抗氧化。GSH的结构中含有一个活泼的巯基-SH，易被氧化脱氧，这一特异结构使其成为体内主要的自由基清除剂。GSH能与进入机体的有毒化合物、重金属离子或致癌物质等相结合，并促其排出体外，起到中和解毒作用。最新研究还表明，GSH能够纠正乙酰胆碱、胆碱酯酶的不平衡，起到抗过敏作用，还可防止皮肤老化及色素沉着，减少黑色素的形成，改善皮肤抗氧化能力并使皮肤产生光泽。

谷胱甘肽可以用高效液相色谱(HPLC)电子化学检测仪检测。还有用先用化学反应，在用反相色谱柱柱，然后用荧光分光光度计定量。

发明内容

本发明要解决的技术问题是：提出一种利用酶比色法(EnzymaticColorimetric Method)技术，计量/连续监测还原型烟酰胺辅酶(还原型辅酶)在340nm波长处吸光度的变化，得以测定谷胱甘肽浓度的方法，同时，本发明还将给出用以实现该方法的谷胱甘肽诊断/测定试剂盒，采用该试剂不仅可以在紫外/可见光分析仪或半、全自动生化分析仪上进行谷胱甘肽浓度测定，而且测定速度快、准确度高，因而可以得到切实的推广应用。

本发明谷胱甘肽浓度测定方法原理如下：

谷胱甘肽+甲醛+辅酶甲醛脱氢酶甲酰基谷胱甘肽+还原型辅酶

这种方法应用甲醛脱氢酶(Formaldehyde dehydrogenase；EC1.2.1.1)酶促反应速率比色法/终点法。甲醛脱氢酶酶解谷胱甘肽反应产同时将辅酶(在340nm处没有吸收峰)还原成为还原型辅酶(在340nm处有吸收峰)，从而得以测定还原型辅酶在340nm处吸光度上升的程度/速度，通过测量340nm处吸光度上升的程度/速度，可以测算谷胱甘肽的浓度大小。

实验表明，从测定结果的准确性和配制成本的经济性两方面综合考虑，无论是单剂、双剂还是三剂，如下成分关系的本发明谷胱甘肽诊断/测定试剂盒较为理想：

缓冲液            100mmol/L

稳定剂            500mmol/L

辅酶              3mmol/L

甲醛脱氢酶        10000U/L

甲醛              20mmol/L

本发明的谷胱甘肽诊断/测定试剂盒可以是单剂，包括：

缓冲液、稳定剂、辅酶、甲醛脱氢酶、甲醛。

试剂盒可以是干粉状态，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液体试剂，直接使用。

也可以将上述单剂试剂配成如下双剂试剂：

试剂1

缓冲液、稳定剂、辅酶、甲醛。

试剂2

缓冲液、稳定剂、甲醛脱氢酶。

辅酶、甲醛脱氢酶、甲醛在试剂1或试剂2中的位置可以不限。试剂盒可以是干粉状态，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液体试剂，直接使用。

还可以将上述单剂试剂配成如下三剂试剂：

试剂1

缓冲液、稳定剂、辅酶。

试剂2

缓冲液、稳定剂、甲醛。

试剂3

缓冲液、稳定剂、甲醛脱氢酶。

辅酶、甲醛脱氢酶、甲醛在试剂1、试剂2或试剂3中的位置可以不限。试剂盒可以是干粉状态，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液体试剂，直接使用。

无论是单剂、双剂还是三剂，本发明测定谷胱甘肽浓度的方法，其辅酶可以是NADP⁺、NAD⁺或thio-NAD⁺中的一种。

具体实施方式

下面结合实施例子对本发明作进一步的说明。

实施例一

本实施例的谷胱甘肽诊断/测定试剂为单试剂，包括：

三(羧甲基)氨基甲烷-盐酸缓冲液     100mmol/L

稳定剂                            500mmol/L

辅酶                              3mmol/L

甲醛脱氢酶                        10000U/L