[发明专利]谷氨酸浓度的测定方法及谷氨酸诊断试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及医药、食品、环境等领域内对谷氨酸浓度的检测，尤其涉及利用酶比色法测定谷氨酸浓度的方法，以及由此制得的谷氨酸诊断试剂盒，属于谷氨酸浓度分析检测技术领域。

背景技术

中国GB5009-2003味精卫生标准分析方法有：①旋光计法，②甲醛滴定法，③凯氏定氮法。味精系指以粮食及制品为原料经发酵提纯的谷氨酸钠。

酶法分析是国际上公认的谷氨酸盐的分析方法，已被多个国际权威组织或机构采纳：如IFU(国际果汁生产者协会)，AIJN(欧盟果蔬汁及饮料生产者联盟)，及MEBAK、OICC、VDLUFA等组织广为推崇，并确定为标准检测方法。已被写入澳大利亚，荷兰，德国，瑞士等多个国家的食品法。国内也有数家果汁、酒类加工企业使用酶法试剂盒作为检测标准。

生物体内存在分解骨质的破骨细胞和形成骨骼的成骨细胞，正常情况下两种细胞的作用保持着良好的平衡。如果平衡被打破、破骨细胞过于活跃，就会导致骨质疏松。破骨细胞中含有谷氨酸，而一种名为“谷氨酸转运体”的蛋白可以将谷氨酸排出破骨细胞，被“释放”的谷氨酸会和细胞表面的受体结合，激活细胞内的酶，抑制破骨细胞分解骨质的作用。

发明内容

本发明的目的是：提供一种测定谷氨酸浓度的方法，以及应用该方法配制而成的谷氨酸诊断试剂盒。

为实现本发明的目的，一种酶比色法测定谷氨酸浓度的方法，利用谷氨酸脱氢酶为作用酶和显色酶，对待测样品中的谷氨酸进行检测，采用以下步骤进行：

首先，将测定的样品与含有辅酶、谷氨酸脱氢酶及水的试剂混匀，使之发生以下反应，

然后，将最终反应物置于紫外/可见光分析仪或半、全自动生化分析仪下，检测主波长340nm吸光度上升的程度/速度，测算出谷氨酸的浓度大小。

实现本发明谷氨酸诊断试剂盒可以是单剂，由以下成分组成：

缓冲液          20～500mmol/L，

稳定剂          1～4000mmol/L，

辅酶            1～6mmol/L，

谷氨酸脱氢酶    1000～80000U/L。

试剂盒可以是干粉状态，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液体试剂，直接使用。

也可以将以上单剂中的各种成分进行组合配制成双剂，比如：

双剂的配方不仅仅限于上述表中所列，其中试剂I的成分：辅酶可以放在试剂II；试剂II中的谷氨酸脱氢酶也可以放到试剂I，如此可以形成多种配方，不再一一列举。试剂盒可以是干粉状态，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液体试剂，直接使用。

此外，为减少各试剂成分之间的交叉影响、保持试剂的稳定性，以便长期储存，以上单剂、双剂的试剂I/试剂II当中通常加入稳定剂，浓度在1～4000mmol/L或0.1％～100％体积比范围之内。

无论是单剂还是双剂，辅酶可以是：NADP⁺、NAD⁺或thio-NAD⁺中的一种。

用作稳定剂的物质可以是：硫酸铵(Ammonia Sulfate)、甘油(Glycerol)、丙二醇(Propylene Glycol)、乙二醇(Ethylene glycol)中的至少一种。

研究表明，从测定结果的准确性和配制成本的经济性两方面综合考虑，无论是单剂还是双剂，如下配方成分关系的诊断/检测试剂盒较为理想，也是本发明的优选方案：

缓冲液          100mmol/L，

稳定剂          500mmol/L

辅酶            3mmol/L，

谷氨酸脱氢酶    18000U/L。