[发明专利]果糖浓度的测定方法及果糖诊断试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及医药、食品、环境等领域内对果糖浓度的检测，尤其涉及利用酶比色法测定果糖浓度的方法，以及由此制得的果糖诊断试剂盒，属于果糖浓度分析检测技术领域。

背景技术

国家相关部门于日前发布实施了《巴氏杀菌乳和UHT灭菌乳中复原乳的鉴定》标准，该标准根据糠氨酸和果糖两种特定物质在液态乳中的含量，来判定是否添加了“复原乳”，乳中果糖含量(mg/L)与糠氨酸含量(每100g蛋白质所含毫克数)比值小于2时，则可判定添加了复原乳。

掺杂使假乳往往口感较差，有些不法奶商常常在掺假奶中加入价格便宜的白砂糖来改善鲜奶口感。测蔗糖就是为了遏制部分奶商的这种不法行为。测蔗糖的方法之一是先将蔗糖在强酸性条件加热分解生成葡萄糖和果糖，然后再测果糖含量。果糖为分析精液质量的一个重要指标。

发明内容

本发明的目的是：提供一种测定果糖浓度的方法，以及应用该方法配制而成的果糖诊断试剂盒。

为实现本发明的目的，一种酶比色法测定果糖浓度的方法，利用果糖脱氢酶为作用酶和显色酶，对待测样品中的果糖进行检测，采用以下步骤进行：

首先，将测定的样品与含有辅酶、果糖脱氢酶的试剂混匀，使之发生以下反应，

然后，将最终反应物置于紫外/可见光分析仪或半、全自动生化分析仪下，检测主波长340nm吸光度上升的程度/速度，测算出果糖的浓度大小。

实现本发明果糖诊断试剂盒可以是单剂，由以下成分组成：

缓冲液        20～500mmol/L，

稳定剂        1～4000mmol/L，

辅酶          1～6mmol/L，

果糖脱氢酶    1000～80000U/L。

试剂盒可以是干粉状态，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液体试剂，直接使用。

也可以将以上单剂中的各种成分进行组合配制成双剂，比如：

双剂的配方不仅仅限于上述表中所列，其中试剂I的成分：辅酶可以放在试剂II；试剂II中的果糖脱氢酶也可以放到试剂I，如此可以形成多种配方，不再一一列举。试剂盒可以是干粉状态，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液体试剂，直接使用。

此外，为减少各试剂成分之间的交叉影响、保持试剂的稳定性，以便长期储存，以上单剂、双剂的试剂I/试剂II当中通常加入稳定剂，浓度在1～4000 mmol/L或0.1％～100％体积比范围之内。

无论是单剂还是双剂，辅酶可以是：NADP⁺、NAD⁺或thio-NAD⁺中的一种。

用作稳定剂的物质可以是：硫酸铵(Ammonia Sulfate)、甘油(Glycerol)、丙二醇(Propylene Glycol)、乙二醇(Ethylene glycol)中的至少一种。

研究表明，从测定结果的准确性和配制成本的经济性两方面综合考虑，无论是单剂还是双剂，如下配方成分关系的诊断/检测试剂盒较为理想，也是本发明的优选方案：

缓冲液      100mmol/L，

稳定剂      500mmol/L

辅酶        3mmol/L，

果糖脱氢酶  8000U/L。

利用酶比色法(Enzymatic Colorimetric Method)技术，计量/连续监测还原型烟酰胺辅酶(还原型辅酶)在340nm波长处吸光度的变化，得以测定果糖浓度的方法，同时，本发明还将给出用以实现该方法的果糖诊断/测定试剂盒，采用该试剂不仅可以在紫外/可见光分析仪或半、全自动生化分析仪上进行果糖浓度测定，而且测定速度快、准确度高，因而可以得到切实的推广应用。

本发明技术方案的突出的实质性特点和显著的进步主要表现在：

(1)本发明完全利用酶比色法测定果糖浓度，测试结果准确；

(2)参与反应的成分都是外加的，不受内、外源物质的污染，测试过程精确度高；