[发明专利]阻断NR2B信号通路的多肽类似物及其制备方法和药物用途

权利要求书

1.一种制作能跨过细胞膜的干扰膜受体与下游分子结合的多肽类似物的方法，其特征在于将跨膜片段置于标记片段的一端，将膜受体的下游分子结合域片段置于标记片段的另一端，形成跨膜片段、标记片段和结合域片段的线性串联重复多肽分子。

2.一种选择性阻断NMDA受体NR2B亚型与下游PSD95分子结合的多肤类似物，该多肤按照权利要求1所述方法制作，将NMDA受体NR2B亚基的羧基端的PSD95结合域多肽置于HIV-1的跨膜片段Tat多肽的一端，中间插入HA标记多肽形成一条串连多肽。其特征在于该多肽类似物能跨过神经细胞摸，选择性地干扰了NMDA受体NR2B亚型与PSD95分子结合，抑制了NR2B与PSD95结合引起的神经细胞毒性。

3.按照权利要求2所述的多肽，其特征在于NMDA受体的多肽阻断剂全长氨基酸排列顺序是Pro-Tyr-Gly-Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Arg-Gly-Lys-Leu-Ser-Ser-Ile-Glu-Ser-Asp-Val-Gly-Lys-Leu-Ser-Ser-Ile-Glu-Ser-Asp-Val，其中Tyr-Gly-Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Arg是HIV调控蛋白的跨膜片段，能携带与其共价结合的异源蛋白转移到细胞内。Lys-Leu-Ser-Ser-Ile-Glu-Ser-Asp-Val是源于流感病毒的血凝素的9个氨基酸组成标记片段，Lys-Leu-Ser-Ser-Ile-Glu-Ser-Asp-Val是NMDA受体NR2B亚单位羰基端的9个氨基酸的多肽，包含NR2B羧基端与PSD-95特异性结合片段。

4.按照权利要求2所述的多肽，其特征在于使用Tat蛋白提高了多肽阻断剂的细胞通透性。由于Tat蛋白没有位置的限制性，故Tat连接NR2B9C肽的N-或C-端，都能发挥跨膜功能。

5.一种选择性阻断NMDA受体NR2B亚型与PSD95结合的多肽类似物的制备方法，包括用化学合成法和PCR法合成该多肽的编码序列DNA，将该DNA插入融合表达载体，转化大肠杆菌，大肠杆菌在精氨酸富集培养基中表达出融合蛋白包含体；包含体经洗涤、溶解、乙醇分级沉淀纯化；提纯的融合蛋白溶于80mmol/L的盐酸中进行酸水解释放NMDA受体NR2B亚型多肽类似物，释放出的多肽调至pH中性，通过阳离子交换层析柱获得目的多肽。

6.根据权利要求5所述的精氨酸富集培养基，其特征在于是一种生产NMDA受体NR2B亚型多肽类似物的高效培养基。精氨酸富集培养基的组成成分为：

蛋白胨(Trypton)              0.5％-1.5％

酵母提取物(Yeast extract)    0.1％-1％

NaCl                         0.5％-1.5％

精氨酸                       0.05-0.5％

7.根据权利要求5所述NMDA受体NR2B亚型多肽类似物，其特征在于能特异性的与PSD-95的结合，使得NR2B与PSD-95解偶联，阻断引起神经兴奋性毒性的下游信号的传导。能够治疗缺血性脑损伤及其它以神经元死亡或凋亡为特征的神经系统疾病。

8.根据权利要求5所述NMDA受体NR2B亚型多肽类似物，其特征在于既能以冻干粉针剂、注射剂的制剂形式单独使用，也能与药物载体组合制成药物组合物，这些药物载体包括：多元醇类、糖类和无机盐类。