[发明专利]一种检测葡萄糖的酶电极的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种酶电极的制备方法，尤其涉及一种高灵敏度的检测葡萄糖的酶电极的制备方法，所制备的电极可以应用于食品或医药卫生中低浓度葡萄糖的检测。

背景技术

自Clark等报道了基于测量O₂还原电流的生物传感器以来[Clark L C.[P]USA：3529455，1970]，这一领域得到了广泛、深入的研究，不同类型的氧化酶结合铂电极组成的电流型生物传感器被大量应用于实践。这些生物传感器多是利用直接电化学法检测酶反应的物质或产物且不能检测低浓度的分析物，此外由于测量氧的还原电流时，电流的大小深受Pt电极(或其它贵金属电极)表面状态影响，使得测量的重现性差，因此在目前报道的生物传感器中基于铂电极法测量H₂O₂氧化电流的酶传感器的应用更加广泛。可以催化过氧化氢的氧化或还原的电化学无机介体如普鲁士蓝(PB)用于氧化酶生物传感器的组装，可以使应用电势大大下降，随之可以避免许多电化学的干扰。基于使用PB修饰电极的葡萄糖传感器的第一个例子是由Karyakin等[KaryakinA.A.，Gitelmacher O.，Karyakina E.E..AAnal.Lett..1994，27(15)：2861-2869.]报道的，其在1995年又继续优化了这个传感器[Karyakin AA，Gitelmacher O V，Karyakina E E.Anal.Chem..1995，67：2419-2423]，这种生物传感器有低的检测限和宽的线性范围。目前，基于PB的传感器的研究其中一个主要的问题就是灵敏度不够。

发明内容

本发明的目的是提供一种高灵敏度的检测葡萄糖的酶电极的制备方法，适用于食品或医药卫生中低浓度葡萄糖的检测，且方法简单易行，具有可控度性，有较高的灵敏度。

本发明的技术方案为：一种检测葡萄糖的酶电极的制备方法，其具体制备步骤如下：

1)将聚阳离子或聚阴离子电解质与酸液配制成离子水溶液，将支撑体电极进行预处理，然后浸入到聚阳离子电解质中，使支撑体电极表面带上正电荷；或者将预处理后的支撑体浸入到聚阴离子电解质中，则支撑体电极表面带上负电荷；

2)将经上述步骤处理后带上正电荷支撑体电极先浸入K₄Fe(CN)₆或K₃Fe(CN)₆和KCl的水溶液，用N₂吹干，再浸入相同浓度的FeCl₃或(NH₄)₂Fe(SO₄)₂和KCl水溶液中，用N₂吹干；或者是将处理后带上负电荷支撑体电极先浸入FeCl₃或者(NH₄)₂Fe(SO₄)₂和KCl的水溶液中，用N₂吹干再浸入相同浓度的K₄Fe(CN)₆或者K₃Fe(CN)₆和KCl的水溶液，用N₂吹干；

3)重复步骤2)1-80次，得到聚电解质/普鲁士蓝膜电极；

4)分别配制葡萄糖氧化酶溶液和两种不同浓度的明胶溶液，明胶溶液2的浓度要大于明胶溶液1的浓度；取葡萄糖氧化酶溶液与明胶溶液1混合均匀；移取上述混合溶液均匀滴于步骤3)制得的电极上，置于冰箱中；然后再将处理后的电极表面浸渍到明胶溶液2中后取出，置于冰箱中后取出，得高灵敏度的检测葡萄糖的酶电极。

其中所述的聚阴离子电解质为聚苯乙烯磺酸钠、聚乙烯磺酸盐、硫酸葡聚糖、硫酸软骨素、海藻酸钠、聚丙烯酸钠、聚甲基丙烯酸、肝素或硫酸肝素中的一种或其中任意两种的混合物；所述的聚阳离子电解质为聚烯丙基胺盐、聚联丙烯基二甲基铵氯化物、聚乙烯醇、胶原、壳聚糖、多聚赖氨酸或聚乙烯基亚胺盐酸盐中的一种或其中任意两种的混合物。聚阴离子或聚阳离子电解质与酸液配制成离子水溶液中，聚阴离子或聚阳离子电解质浓度为0.005-0.05mol/L，离子溶液的pH值控制在1-4。

其中所述的支撑体电极为金属电极或玻璃电极。