[发明专利]三七皂苷体内五种活性成分的同时定量分析方法

权利要求书

1、一种血浆中三七皂苷R1、Rg1、Rd、Re和Rb1同时定量分析方法，包括上述五种物质的提 取方法，色谱和质谱参数，方法学的考察，药代动力学研究中的应用。其特征为：正丁醇液- 液萃取血浆样品中的三七皂苷R1、Rg1、Rd、Re和Rb1，建立相应的色谱和质谱方法，对上 述样品在血浆中的专属性、线性、回收率、日内(间)差、稳定性和最低定量限进行考察并用 于体内三七总皂苷的药代动力学研究。

2、根据权利要求1所述的方法，其特征是：血浆100μl，精密加入浓度为500ng mL^-1的内标 地高辛溶液10.0μl，漩涡混匀器上混匀30s，加入1.0ml的水饱和正丁醇，继续混匀3min， 将混匀物置于离心机中，8000rpm离心5min，取上层有机相0.8ml至干净的Eppendorf管中， 真空减压浓缩干燥器上将有机相正丁醇挥干，残渣加入100.0μl甲醇，漩涡器上震荡融解 2min，将溶解液置于高速低温冰箱中22000rpm离心10min，取上清液10.0μl上清液注入岛 津2010型HPLC/ESI/MS仪进行测定。

3、根据权利要求1所述方法，其特征是：色谱柱：Luna-C₁₈柱，150×2.0mm(ID.)， 5μm(Phenomenex，USA)，柱温：40℃；流动相：水相(A相)，0.5mM的氯化铵溶液；有机相 (B相)，乙腈。梯度洗脱程序见下表，流速为0.2ml L^-1。

4、根据权利要求1所述的方法，其特征是：LC-MS质谱条件：电喷雾离子源参数如下：干 燥气(氮气)流速为1.5L min^-1；曲型脱溶剂装置(CDL)温度为250℃；加热块(Block)℃为200℃； 检测器电压为1.6kV；探针(probe)电压为4.5kV；裂解器电压为-70V。离子化方式：电喷雾离 子化，负离子方式；选择性离子(SIM)检测：各成份荷-质(m/z)比分别为967.75、835.40、 981.80、981.80和1143.65。

5、根据权利要求1所述的方法，其特征是：在上述2、3、4条件下考察了三七总皂苷在血浆 样品中的专属性、线性、回收率、日内(间)差、稳定性和最低定量限，表明专属性良好，五 种被测物线性R²均在0.99以上，回收率均为67.47％-94.18％，日内(间)精密度为 1.82％-11.46％。在此基础上进行了三七总皂苷体内的药代动力学研究。