[发明专利]一种快速测定咪唑立宾血药浓度的方法

说明书

技术领域

本发明属医学检验领域，涉及体内药物的分析测定方法，具体涉及一种快速测定人血浆中咪唑立宾浓度的方法。

背景技术

咪唑立宾(mizoribine，MZR)是一种嘌呤核苷合成抑制剂，能特异性地抑制快速增长的淋巴细胞，从而产生免疫抑制作用。近年来在临床上用于抑制肾移植时的排斥反应，同时也用于治疗狼疮性肾炎、类风湿性关节炎及肾病综合征等自身免疫性疾病。该药的个体间药动学差异大，临床上须进行血药浓度监测以调整个体化给药方案。

目前关于生物样本中MZR的测定方法，国内外相关报道很少，现有的方法均未采用内标法定量，测定准确度、精密度较低，且存在灵敏度低(最低定量限为0.1mg·L^-1)、操作繁琐费事、效率低、分析成本高等种种缺陷，不适合常规治疗药物浓度监测。

发明内容

本发明的目的是克服已有技术的缺陷，提供一种简便、快速、灵敏的测定体内咪唑立宾血药浓度的方法。

本方法无需昂贵的设备，无需有机溶剂，具有操作简便、快速、血浆用量少、成本低、环境污染小等优点，适合常规血药浓度监测。

本方法的技术方案是：待测样品加入内标，经酸性沉淀剂预处理后，经水性流动相在色谱柱分离，用紫外检测器检测。

包括下述步骤：

1)样品预处理

取待测样品，加入内标后以酸性沉淀剂进行蛋白沉淀，

所述的内标为阿糖胞苷，酸性蛋白沉淀剂为0.1-0.5mol·L^-1高氯酸溶液；

2)样品分离与分析

采用通用型的液相色谱柱，其填料为Hypersil BDS C18 5um，高效液相系统采用通用型的紫外检测器以及高压泵，流动相采用含有高氯酸的10mmol·L^-1磷酸二氢钾缓冲液(PH6.0-6.5)，等度洗脱：

本方法流动相优选高氯酸浓度为5-30mmol·L^-1；

采用紫外检测器280±1nm检测阿糖胞苷和MZR的峰面积，用标准曲线方程换算成浓度。

本方法具有以下优点：

1、样品预处理过程加入内标，有利于提高测定方法的准确性和精密度。

2、预处理方法简便：一步酸性沉淀剂蛋白沉淀法，适用于常规检测。

3、专属性强：采用填料为Hypersil BDS C18 5um的色谱柱作为固定相，含高氯酸的10mmol·L^-1磷酸二氢钾缓冲液作为流动相，等度洗脱，11分钟完成测定，内源性物质和常用合并用药不干扰上述药物的测定。

4、灵敏度高：最低定量限为：0.02mg·L^-1，优于文献报道的0.1mg·L^-1。

本发明方法快速准确、灵敏度高、操作简便、成本低、适合于临床常规血药浓度监测。MZR的线性范围为0.02-10mg·L^-1。平均方法回收率为101.84％，日内和日间精密度RSD均小于7％。

附图说明

图1是典型色谱图，

其中A：未服用咪唑立宾的肾移植患者血浆；B：空白血浆+标准品咪唑立宾(浓度：0.5mg·L^-1)+内标阿糖胞苷(浓度：2mg·L^-1)；

1：咪唑立宾；2：阿糖胞苷。

图2是服用咪唑立宾的肾移植患者血浆色谱图(浓度：0.31mg·L^-1)其中，1：咪唑立宾；2：阿糖胞苷。

具体实施方式

实施例1

色谱条件

色谱柱：Hypersil BDS C18(4.6×250mm，5μm，大连依利特公司)；流动相：10mmol·L^-1磷酸二氢钾溶液(含高氯酸10mmol·L^-1，PH6.0 6.5)；流速：1.5mL·min^-1；柱温：室温；检测波长：280nm。

血浆样品预处理

取血浆样品200μL，加入20mg·L^-1阿糖胞苷20μL，加入蒸馏水20μL，涡旋混合30s，加入0.1mol·L^-1高氯酸，涡旋混合1min，10000r·min^-1离心5min，取上清液20μL进样。内标法以MZR与阿糖胞苷峰面积比定量。

专属性