[发明专利]用于预防急性移植物抗宿主病的干细胞制剂

说明书

技术领域

本发明属于干细胞与免疫学领域，涉及一种新的干细胞制剂，尤其是涉及用于预防急性移植物抗宿主病的干细胞制剂。

背景技术

骨髓移植是目前治疗许多恶性血液疾病和自身免疫性疾病的其中一种有效的方法，由于异基因骨髓移植日益普遍，使异基因骨髓移植后移植物抗宿主病(graft versus host disease，GVHD)的发生率和致死率不断升高，GVHD的发生主要是由于供、受者之间除主要组织相容性抗原一致外，还存在免疫遗传学的差异，供者淋巴细胞(主要是T淋巴细胞)对受者产生的免疫攻击反应所造成的，严重影响了患者的生活质量，并成为导致移植后非复发相关死亡的主要原因。为了降低GVHD，通常采用去除T细胞的造血细胞移植，但不利于免疫重建，更容易发生移植后感染。由于上述问题相互交织，至今也难于找到各方面均可兼顾的综合处理方案，因此严重影响了同种造血干细胞移植的治疗效果。

骨髓间质干细胞(mesenehymal stem cells，MSCs)是骨髓中具有强大的体外增殖和分化能力的干细胞。近年更发现MSCs具有独特的免疫学特征。Klyushnenkova等发现人MSCs在体外同样可抑制同种异体混合淋巴细胞反应。而Bartholomew等率先报道了灵长类动物的MSCs可抑制同种异体混合淋巴细胞反应，体内注射供者来源的体外扩增MSCs可延长同种异体移植皮肤的寿命，显示MSCs具有独特的免疫学特性。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于预防急性移植物抗宿主病的干细胞制剂，将该干细胞制剂应用于骨髓移植后的病人，可降低急性移植物抗宿主病(GVHD)的发生率，并且明显降低其严重程度，从而为综合解决造血干细胞移植后的问题提供了新的途径。

本发明所述的一种用于预防急性移植物抗宿主病的干细胞制剂，为间质干细胞与造血干细胞的联合移植的干细胞制剂；

所述的间质干细胞的制备方法是：取同种异体健康骨髓，收获单个核细胞进行培养，借助间质干细胞的贴壁特性，反复换液、弃悬浮细胞，逐步获得纯的骨髓间质干细胞；通过形态学观察、流式细胞术分析、向成骨、成脂、神经样细胞分化的多向分化潜能鉴定，证实分离到的细胞为间质干细胞，并不断传代扩增，移植前细胞活度检测＞95％；

所述的造血干细胞的准备同常规骨髓移植方案。

所述的干细胞制剂经静脉输入人体受体，间质干细胞的输入剂量为0.5-1.5×10⁶细胞/Kg体重，造血干细胞的输入剂量同常规骨髓移植方案。

发明人是在参考造血干细胞移植剂量(CD34+细胞＞3×10⁶/kg体重，单个核细胞＞3×10⁸/kg体重)的基础上，确定上述间质干细胞的输入剂量，经实验证明，输入上述剂量的间质干细胞后，受体无不良反应，而且疗效确切。

本发明所述的另一种用于预防急性移植物抗宿主病的干细胞制剂，为间质干细胞与造血干细胞的联合移植的干细胞制剂；

所述的间质干细胞的制备方法是：取同种异体健康骨髓，收获单个核细胞进行培养，借助间质干细胞的贴壁特性，反复换液、弃悬浮细胞，逐步获得纯的骨髓间质干细胞；通过形态学观察、流式细胞术分析、向成骨、成脂、神经样细胞分化的多向分化潜能鉴定，证实分离到的细胞为间质干细胞，并不断传代扩增，移植前细胞活度检测＞95％；

所述的造血干细胞的准备同常规骨髓移植方案；

所述的干细胞制剂经静脉输入大鼠受体，间质干细胞的输入剂量为6×10⁶个/只体重，造血干细胞的输入剂量同常规骨髓移植方案。

关于间质干细胞输入大鼠的剂量是根据预实验所得的。

应用本发明所述的干细胞制剂，即间质干细胞与造血干细胞的联合移植的干细胞制剂，可预防骨髓移植(BMT)后急性移植物抗宿主病(GVHD)的出现，不仅明显降低GVHD的发生率，而且一旦出现GVH D时可明显降低其严重程度；同时可促进造血重建和免疫重建，从而极大地提高造血干细胞移植的治疗效果。

附图说明

图1为骨髓移植后各组大鼠的生存曲线(n＝10)。图中，A组：单纯骨髓移植组；B组：GVHD组；C组：MSCs共移植组；D组：单纯照射组。

图2为移植后第18天GVHD组大鼠的照片，图中显示大鼠腹部明显脱毛。

图3为MSCs共移植组大鼠(左侧)与GVH D组大鼠(右侧)的对照；照片显示，右侧的GVHD组大鼠已发病，腹部见明显脱毛，左侧的MSCs共移植组大鼠未见脱毛等发病表现。