[发明专利]脐血单个核细胞体外扩增并保持造血细胞植入能力的方法

权利要求书

1.脐血单个核细胞体外扩增并保持造血细胞植入能力的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)取骨髓液，分离出单个核细胞，用培养液培养出骨髓基质细胞；

(2)步骤(1)培养的基质细胞层融合后，经15Gy⁶⁰Co照射，洗涤；

(3)将经步骤(2)后基质细胞加入无血清培养液中；

(4)往步骤(3)的培养液中加入外源性细胞因子，建立造血细胞培养体系；

(5)从脐血中分离出单个核细胞，种植到步骤(4)建立的造血细胞培养体系中进行培养扩增。

2.根据权利要求1所述的脐血单个核细胞体外扩增并保持造血细胞植入能力的方法，其特征在于，步骤(3)所述的骨髓基质细胞为人骨髓基质细胞。

3.根据权利要求1所述的脐血单个核细胞体外扩增并保持造血细胞植入能力的方法，其特征在于，步骤(3)所述的无血清培养液为Stemspan^Tm无血清培养液。

4.根据权利要求1所述的脐血单个核细胞体外扩增并保持造血细胞植入能力的方法，其特征在于，步骤(4)所述的外源性细胞因子包含：SCF、FL和TPO。

5.根据权利要求2所述的脐血单个核细胞体外扩增并保持造血细胞植入能力的方法，其特征在于，所述的外源性细胞因子SCF、FL和TPO的浓度均为40ng/ml。

6.根据权利要求1所述的脐血单个核细胞体外扩增并保持造血细胞植入能力的方法，其特征在于，步骤(1)中培养人骨髓基质细胞的培养液为IMDM。

7.根据权利要求1所述的脐血单个核细胞体外扩增并保持造血细胞植入能力的方法，其特征在于，步骤(5)所述的培养扩增的条件为37℃，体积分数为5％的CO₂全湿培养箱中培养。