[发明专利]一种制备链霉亲和素标记的藻蓝蛋白类荧光蛋白质的方法无效
| 申请号： | 200710030773.4 | 申请日： | 2007-10-09 |
| 公开（公告）号： | CN101408541A | 公开（公告）日： | 2009-04-15 |
| 发明（设计）人： | 赵开弘;周明;夏坤;佟顺刚 | 申请（专利权）人： | 广州天宝颂原生物科技开发有限公司;华中科技大学 |
| 主分类号： | G01N33/52 | 分类号： | G01N33/52 |
| 代理公司： | 广州市南锋专利事务所有限公司 | 代理人： | 刘 媖 |
| 地址： | 510663广东省广州市科学*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 制备 亲和 标记 蛋白 荧光 蛋白质 方法 | ||
1.一种制备链霉亲和素标记的藻蓝蛋白类荧光蛋白质的方法，其特征在于包括下述步骤：
(1)采用基因工程方法，将beta155裂合酶基因或其同源基因克隆于表达载体中，得到beta裂合酶表达质粒；
(2)用基因工程方法将藻蓝蛋白类脱辅基蛋白基因或其同源基因和链霉亲和素基因拼接后克隆于第二个表达载体中，可以表达链霉亲和素和藻蓝蛋白的融合蛋白，得到链霉亲和素标记的脱辅基蛋白表达质粒；
(3)用基因工程方法将PCB生物合成酶基因ho1和pcyA或其同源基因同时克隆于第三个表达载体中或分别克隆于第四个表达载体中，得到PCB合成质粒；
(4)将beta裂合酶表达质粒、链霉亲和素标记的脱辅基蛋白表达质粒、PCB生物合成酶质粒依次转入配套的宿主菌，当这些表达质粒都转入宿主菌后，得到相应的工程菌，应用此工程菌发酵后，按常规蛋白质提纯技术，提纯得到相应的链霉亲和素标记的藻蓝蛋白类荧光蛋白质。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的宿主菌为大肠杆菌。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的beta155裂合酶基因是指与Anabaena sp.PCC7120中a115339基因同源的基因。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的藻蓝蛋白类脱辅基蛋白基因是指与Anabaena sp.PCC7120或M.laminosus sp.PCC7603中cpcB基因同源的基因。
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