[发明专利]一种细菌鉴定试剂盒及其制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明涉及微生物学细菌鉴定技术领域，尤其涉及一种用于鉴定细菌唯一碳源利用的细菌鉴定试剂盒及其制备方法。

背景技术

随着生物产业的兴起和发展，快速、准确鉴定微生物已成为医学临床、环境、工业和农业等多个领域的迫切需要。微生物常规的鉴定技术有形态结构和培养特性观察、生理生化试验、血清血试验、快速鉴定组合、分子生物学方法等。这些方法或者耗时，或者费用过于昂贵，或者技术掌握有一定的难度，无法满足更广范围的用户需求。

近20年来，随着微电子、计算机、分子生物学等先进技术向微生物生学领域的渗透和多学科的交叉，微生物的鉴定试剂盒以其快速简便的优势引起人们的兴趣，近年来相继出现了一些商品鉴定系统。细菌能否利用某些化合物作为唯一碳源，反映该菌是否产生代谢这种含碳化合物有关的酶，因此可以作为细菌鉴定的重要特征。

国际上现有Biolog和Biotype100两种类似试剂盒，Biolog试剂盒选用四唑紫作为细菌能否利用测试碳源的指示剂，Biotype100试剂盒以肉眼观察细菌生长的浊度作为判读标志。由于二者含48种相同碳源，约占测定总碳源数量的50％，不包含一些常见的碳源，两试剂盒测定的结果可比性低。不同细菌对95种不同碳源的代谢情况是不同的，即每种细菌形成各自特有的代谢指纹图谱。Biolog板利用微生物消耗碳源进行呼吸时，会将四唑紫染色剂，从无色还原成紫色，从而在微生物的鉴定试剂盒上形成该微生物特征性的反应模式或“指纹”。以上两进口试剂盒价格较贵，且由于二者含48种相同碳源，约占测定总碳源数量的50％，不包含一些常见的碳源，两试剂盒测定的结果可比性低。

发明内容

本发明目的在于提供一种新的用于鉴定细菌碳源利用的试剂盒，选用合适的指示剂，和更加丰富全面的测试碳源，结果的可比性大大提高，克服了现有技术的不足。

本发明的另一个目的是提供了所述试剂盒的制备方法。

本发明还有一个目的是提供了所述试剂盒的使用方法以及在鉴定革兰氏阴性细菌和阳性细菌方面的应用。

本发明的技术方案是提供一种细菌鉴定试剂盒，包括96孔酶标板、培养基、测试碳源和指示剂，所述指示剂为噻唑兰。

所述噻唑兰的浓度为0.5％。

所述的细菌鉴定试剂盒的培养基成分为：

A组分：900mL

NaNO₃ 10g，K₂HPO₄ 2.0g，KH₂PO₄ 1.0g，NaCl 0.1g，CaCl 0.1g，FeCl₃ 0.01g，MgSO₄.7H₂O 0.3g，MnSO₄.4H₂O 58μM，H₃BO₃ 82μM，ZnSO₄.7H₂O 3.5μM，KI 6.0μM，CuSO₄.5H₂O 0.8μM，Na₂MoO₄.2H₂O 0.4μM，CoCl₂.6H₂O 0.4μM，FeSO₄.7H₂O 54μM，Na₂-EDTA 54μM；

B组分：下列a，b，c各2.5mL

a.生物素20μg，VB12 40μg，蒸馏水100mL

b.盐酸硫胺素10mg，烟酸10mg，泛酸钙10mg，对氨基苯甲酸10mg，蒸馏水100mL

c.叶酸2mg，0.001N NaOH 100mL。

A组分和B组分按照现有技术分别进行高温灭菌和滤膜灭菌后再进行混合使用。