[发明专利]一种根瘤固氮菌株系BXYD3及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种根瘤固氮菌株系BXYD3及其应用。

背景技术

生物固氮是生命科学中的重大基础研究课题之一，它在生产实际中发挥着重要作用。共生固氮是生物固氮中最重要的一种。豆科植物与根瘤菌的共生由于具有固氮能力强、固氮量大、抗逆能力强等特点，成为生物固氮研究的焦点。国内外大量试验证明，接种根瘤菌在多数土壤中可以提高豆科作物的产量和品质。接种高效根瘤菌，作为大豆增产的主要措施，在我国北方已得到了大面积的应用。

当前，大豆已成为华南广大酸性缺磷红壤很有价值的豆科作物之一。长期以来，虽然大豆在酸性缺磷红壤区具有一定的种植面积，但由于南方土壤偏酸性，普通根瘤菌在南方地区鲜有应用。其中一个原因是接种根瘤菌剂，遇到了根瘤菌能否耐酸和耐铝的问题。为了提高根瘤菌的结瘤率和固氮效果，必须选育耐酸、耐铝的根瘤菌株以适应酸性土壤条件，这样才能获得高产。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术存在的问题，提供一种根瘤固氮菌株系统BXYD3，该根瘤固氮菌株系是慢生根瘤菌属的新菌株系，具有耐酸铝、高效固氮的特点。

本发明的另一个目的是提供上述根瘤固氮菌株系BXYD3在豆科植物共生固氮中的应用。

本发明的上述技术目的是通过以下技术方案来实现的：

本发明公开的根瘤固氮菌株系BXYD3已于2007年7月28号保藏于武汉大学中国典型培养物保藏中心，其简称为CCTCC，保藏编号为CCTCC NO：M207123。

一、根瘤固氮菌株系BXYD3的分离

1)取新鲜根瘤，用水冲洗干净，并用滤纸吸干表面水分；

2)放入95％的酒精中处理3分钟，再放入0.1％HgCl₂中，灭菌3～5分钟，取出后用无菌水冲洗5～6次；

3)在用火焰灭过菌的载玻片上切成两半，用无菌镊子夹住半个瘤，切口面向YMA培养基表面划线，YMA培养基的配方如表1所示，倒置后在28℃下培养；

表1YMA(Yeast Mannitol Agar)培养基配方(L^-1)

  试剂名  用量  试剂名  用量  甘露醇  MgSO₄·7H₂O  NaCl  酵母粉  10g  0.2g  0.1g  3g  K₂HPO₄  KH₂PO₄  CaCO₃  琼脂  0.25g  0.25g  3g(保存时加)  15g

4)待长出菌体后，先根据以下两个方面初步判断是否为根瘤菌：

①菌落形态：根瘤菌的菌落为圆形、乳白色、半透明、边缘整齐、粘质或多或少。培养3～5天菌落直径达2～4mm为快生型根瘤菌，培养7～10天菌落才1mm的为慢生型根瘤菌。

②菌体形态：标记初步确认为根瘤菌菌落，从中挑取菌苔涂片，进行革兰氏染色，油镜下观察。根瘤菌为(0.5～0.9)×(1.2～0.3)μm的小杆菌。内常含β-羟基丁酸，即折射强的似空洞的颗粒或使菌体呈环节状，革兰氏阴性(G-)，无芽孢，菌体单个或成对。

5)根据上述两个方面，从平板上挑选形态上像根瘤菌的菌落在平板上划线培养。3天之后观察菌落情况，一直观察到15天，因为慢生根瘤菌需7～15天出现菌落。