[发明专利]一种具有抗白血病作用的miR－181a反义寡核苷酸及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及核苷酸，具体涉及一种具有抗白血病作用的miR-181a反义寡核苷酸及其应用。

背景技术

MicroRNA(简称miRNA)是存在于真核生物中的一类长度约为22nt的非编码小分子RNA，参与基因转录后水平调控，呈现出组织特异性或发育阶段特异性表达特征。MicroRNA基因存在于基因组的基因间隔区或内含子中，通过与靶mRNA序列的3′非翻译区或编码区以碱基互补配对的方式来执行对靶mRNA的转录翻译抑制的功能，从而调控基因的表达。

随着生物信息学的迅猛发展和基因克隆技术的不断改进，已经在生物体内发现了大量的miRNA，并且建立了miRNA数据库(http://www.sanger.ac.uk)，其中包括了人类已经发现的533个miRNA。

miRNA能够通过两种不同的机制指导RISC下调目的基因的表达：mRNA剪切和翻译抑制。miRNA与其靶基因的互补程度决定了它以何种机制沉默靶基因。一旦miRNA组装进入效应复合物RISC，当其与靶mRNA几乎完全互补时就指导mRNA特异性切割，引发靶mRNA的降解；当互补程度较低时就指导mRNA翻译抑制。

反义技术(antisense technology)是一种根据碱基互补原理，用人工合成或生物体表达的特定互补的DNA或RNA片段(或其化学修饰产物)，阻断从基因到蛋白质的信息流，以达到抑制或阻断基因表达的目的。反义核酸主要指反义RNA、反义DNA(ASODN)以及核酶，反义技术是一种新的药物开发方式，利用这一技术研制的药物称反义药物，通常指反义寡核苷酸(antisenseoligonucleotide)。

发明内容

本发明的目的之一是提供一种具有抗白血病作用的miR-181a反义寡核苷酸，本发明所提供的具有抗白血病作用的microRNA反义寡核苷酸，包含如下所示的序列SEQ NO.2：5′-actcaccgacagcgttgaatgtt-3′。

所述的具有抗白血病作用的miR-181a反义寡核苷酸可以经过不同的化学修饰，如甲氧修饰、硫代修饰。

本发明的另一目的是提供这种具有抗白血病作用的miR-181a反义寡核苷酸在制备治疗白血病药物中的应用。所述的应用是将所述的核苷酸按本领域常用的方法制成各种制剂。

本发明所述的具有抗白血病作用的miR-181a反义寡核苷酸的序列是根据白血病细胞K562中的miR-181a序列设计的反义寡核苷酸序列(Antisense-microRNAs-oligonucleotides，AMO)。所以相对应地，5′-actcaccgacagcgttgaatgtt-3′在本发明中称为AMO-miR-181a。

本发明所述的具有抗白血病作用的microRNA反义寡核苷酸能够有效地抑制白血病细胞中的miR-21和miR-181a这两种基因的表达，促进白血病细胞凋亡，从而能够有效地治疗白血病。并且抑制效果呈现明显的量效关系，经实验证明，AMO浓度为0.6μmol/L时对白血病细胞生长的抑制效果为最佳。

附图说明

图1为不同浓度AMO对白血病细胞K562的生长抑制作用(72h)图。

图2至图5为AMO(0.6μmol/L)作用于白血病细胞K562 24h对细胞周期的影响图(其中p2：sub G₁；P3：G₀/G₁；P4：S；P5：G₂/M，图2为随机对照组，图3为空白对照组，图4为AMO-miR-181a组，图5为AMO-miR-21组)。

图6至图9为AMO(0.6μmol/L)作用于白血病细胞K562 48h对细胞周期的影响图(其中p2：sub G₁；P3：G₀/G₁；P4：S；P5：G₂/M，图6为AMO-miR-21组，图7为AMO-miR-181a组，图8为空白对照组，图9为随机对照组)。

图10为同时间AMO对白血病细胞K562的生长抑制作用(0.6μmol/L)图。

具体实施方式

实施例1  本发明的反义寡核苷酸(以下简称AMO)的制得