[发明专利]一种检测农副产品中黄曲霉毒素B1的方法

权利要求书

1.一种检测农副产品中黄曲霉毒素B1的方法，其特征在于包括以下步骤：

1)在石英晶体微天平金电极表面制备黄曲霉毒素B₁压电免疫传感器；

2)制备纳米金标记的羊抗鼠IgG抗体；

3)作标准工作曲线：

取不同浓度的黄曲霉毒素B₁标准溶液，加入常规浓度量的黄曲霉毒素B₁单克隆抗体，再加入牛血清白蛋白，混匀，取常规量滴到已制备好的黄曲霉毒素B₁压电免疫传感器，37℃环境中反应30min；接着加入纳米金标记的羊抗鼠IgG抗体，实时检测压电石英晶体微天平的频率变化；改变标准浓度的黄曲霉毒素B₁，按上述步骤测定一系列黄曲霉毒素B₁的标准溶液，用压电石英晶体微天平频率变化值与黄曲霉毒素B₁浓度绘制标准工作曲线；

4)样品检测：

取处理好的样品溶液，加入常规浓度量的黄曲霉毒素B₁单克隆抗体，再加入牛血清白蛋白，混匀，取常规量滴到已制备好的黄曲霉毒素B₁压电免疫传感器，在37℃环境中反应30min；接着加入纳米金标记的羊抗鼠IgG抗体，实时检测压电石英晶体微天平的频率变化，记录频率变化值；将频率变化值与第3)步绘制的标准工作曲线对照获得样品中黄曲霉毒素B₁的数值。

2.根据权利要求1所述的检测农副产品中黄曲霉毒素B1的方法，其特征在于步骤1)中所述黄曲霉毒素B₁压电免疫传感器由以下步骤制备：

(1)石英晶体微天平金电极表面的半胱氨自组装：将金电极浸入2.0mmol/L的半胱氨水溶液中，静置过夜，取出金电极，金电极表面用纯水清洗三次，即在金电极表面获得一层致密均匀的半胱氨自组装单层膜；

(2)石英晶体微天平表面抗体固定化：将自组装了半胱氨自组装单层膜的晶振浸入5.0％(VN)戊二醛溶液中，静置1～1.5小时，取出金电极，金电极表面用纯水清洗三次，再将含10.0μg/mL黄曲霉毒素B₁的牛血清白蛋白交联物溶液20μL滴至电极表面，静置1～1.5小时，电极表面用纯水清洗三次，取质量分数为1％的牛血清白蛋白溶液50μL滴至电极表面，静置封闭1～1.5小时，电极表面用纯水清洗三次，即获得黄曲霉毒素B₁压电免疫传感器。

3.根据权利要求1所述的检测农副产品中黄曲霉毒素B1的方法，其特征在于步骤2)中所述纳米金标记的羊抗鼠IgG抗体的制备按以下方法进行：

取纳米金胶体250μl，用0.1mol/L碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液调节pH为9.0；取羊抗鼠IgG抗体5μl，逐滴加入到金溶胶中，强烈搅拌10min～20min，然后于室温孵育1～1.5h，初步制得纳米金标记抗体；加入质量分数为5.0％的牛血清白蛋白(BSA)溶液于纳米金标记抗体溶液中，使BSA最终质量分数为1.0％，封闭纳米金标记抗体；将纳米标记抗体置入1.5mL的离心管中，以15000r/min的速度冷冻离心10min，控制离心温度为4℃；弃去上层清液，用含质量分数为0.1％、pH 7.4的BSA磷酸缓冲溶液洗涤暗红色沉淀物2次；将该沉淀物重新悬浮于质量分数为0.1％的BSA-PBS缓冲液中，制得纳米金标记抗体。