[发明专利]用于检测日本血吸虫的高灵敏质量放大压电免疫传感器及制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于临床检测领域，具体涉及血吸虫的检测。

背景技术

血吸虫病是一种危害性很大的寄生虫传染病，在亚非拉等地区很是猖獗。现在已有一些检测方法应用于临床，例如：免疫电泳沉积，酶联免疫检测，直接荧光检测和放射性免疫分析等。但是这些方法比较复杂，费时，并且往往需要昂贵的仪器或放射性物质，更重要的是这些方法往往不能很好的对血吸虫病进行早期诊断。因此随着时间的推移，很有意义和必要开发一种快速，灵敏，价廉的血吸虫病诊断方法。

近年来，压电免疫传感器在免疫检测领域受到了人们的广泛关注。压电传感器，它对压电石英晶片物质吸附非常敏感，其频率下降值与吸附物质的质量有比例关系，对于一个9MHz的AT切型石英晶体(φ＝6mm)来说，其气相中的质量灵敏度可达0.66 Hz/ng，是一种非常灵敏的质量检测工具，可直接监测免疫亲和吸附反应引起的质量变化，无需任何标记，被认为是最简便的免疫传感检测技术，一些压电免疫传感器已开始应用于医学临床诊断上。但是该方法对于日本血吸虫病轻度感染者和早期诊断的临床检测，仍不能很好的满足临床检测的需要，其检测灵敏度还可进一步提高。

发明内容

本发明目的在于克服现有血吸虫病高灵敏检测技术往往需要昂贵的仪器或放射性物质等方面的不足，利用酶催化放大效应，提供一种设备简单、价格低廉的高灵敏血吸虫抗体免疫传感检测技术。

为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案。

一种用于检测日本血吸虫的高灵敏质量放大压电免疫传感器，包括压电石英晶振，组装在压电石英晶振上的纳米金层和固定在纳米金层上的巯基化日本血吸虫抗原。

一种制备上述用于检测日本血吸虫的高灵敏质量放大压电免疫传感器的方法，包括以下步骤：

1、日本血吸虫抗原(SjAg)巯基化

将巯基化试剂SATA(S-acetylthioglycolic Acid N-hydroxysuccinimide ester)在弱碱性条件下直接偶联到日本血吸虫抗原分子上，再在碱性溶液中对反应产物进行水解，反应完成后，将最终产物透析，最后得到巯基化血吸虫抗原(SjAg-SH)。

所述弱碱性溶液为碳酸氢钠溶液，碱性溶液为氢氧化钠溶液。

巯基化抗原制备方法反应原理如下：

2、传感器的组装

1)、压电石英晶振预处理：将压电石英晶振进行清洗除去表面污物。

2)、纳米金层自组装：将上述处理过的压电石英晶振浸泡在己二硫醇的乙醇溶液中组装己二硫醇单层，反应完成后冲洗干净，在自组装了己二硫醇的压电石英晶振上滴加适量纳米金溶液，自组装纳米金层。

3)、抗原固定化：将自组装纳米金层的压电石英晶振水洗干净后，滴加SjAg-SH溶液到压电石英晶振上，实现血吸虫抗原的吸附固定。

4)、封闭：将上述固定了血吸虫抗原的压电石英晶振清洗后，滴加BSA溶液到压电石英晶振上进行封闭，制备得到高灵敏质量放大压电免疫传感器。

5)、保存：将压电免疫传感器保存在4℃的冰箱中备用。

本发明高灵敏质量放大压电免疫传感器用于检测日本血吸虫抗体的方法，包括以下步骤：

1、免疫反应过程：将所述高灵敏质量放大压电免疫传感器置于不同浓度的血吸虫抗体溶液中，反应完成后，清洗压电免疫传感器去除没有结合的抗体，再在压电免疫传感器压电石英晶振上滴加酶标二抗(protein A-HRP)，反应完成后，再用PBS清洗干净。

2、检测过程：

将清洗干净的压电石英晶振放入压电检测糟中，并向糟中加入一定量4-氯-1-萘酚，待频率稳定时，记下起始频率值，再向检测糟中加入适量H₂O₂溶液，记录相应的频率变化值，传感器可在10～200ng/mL范围内定量检测血吸虫抗体，检测下限5ng/mL。