[发明专利]靶向表皮生长因子受体的小干扰RNA重组腺病毒及其用途

权利要求书

1.靶向表皮生长因子受体的小干扰RNA重组腺病毒，其特征是在腺病毒载体中，插入了靶向表皮生长因子受体的下述小干扰RNA表达模板：

5’-TCGAGGGAGCTGCCCATGAGAAATTTCAAGAGAATTTCTCATGGGCAGCTCCTT A-3’

3’CCCTCGACGGGTACTCTTTAAAGTTCTCTTAAAGAGTACCCGTCGAGGAA TGATC-5’。

2.根据权利要求1所述的靶向表皮生长因子受体的小干扰RNA重组腺病毒，其特征是所述的腺病毒载体是pSilencer adeno 1.0-CMV腺病毒载体系统。

3.根据权利要求1所述的靶向表皮生长因子受体的小干扰RNA重组腺病毒的制备方法，其特征是包括下述步骤：

1)构建和鉴定靶向表皮生长因子受体的小干扰RNA穿梭载体，

包括：设计及合成小干扰RNA DNA表达模板：

5’-TCGAGGGAGCTGCCCATGAGAAATTTCAAGAGAATTTCTCATGGGCAGCTCCTT A-3’

3’CCCTCGACGGGTACTCTTTAAAGTTCTCTTAAAGAGTACCCGTCGAGGAA TGATC-5’

所述寡核苷酸退火形成双链结构；

表达模板与穿梭载体连接；

穿梭载体转化，测序鉴定，提取穿梭载体，得靶向表皮生长因子受体的小干扰RNA穿梭载体；

2)重组及鉴定腺病毒

包括：穿梭载体和骨架载体线性化；采用磷酸钙法将线性化的穿梭载体和骨架载体共转染293细胞，发生同源重组，得靶向表皮生长因子受体的小干扰RNA重组腺病毒。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征是所述的步骤1的测序鉴定引物为：

上游引物：5’ggatttccaagtctccac-3’

下游引物：5’agcaccttccagatctgc-3’。

5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征是所述的步骤1的靶向表皮生长因子受体的小干扰RNA穿梭载体，其中，修饰的CMV启动子驱动小干扰RNA表达，由修饰的SV40 polyA signal作为终止子。

6.权利要求1的靶向表皮生长因子受体的小干扰RNA重组腺病毒在制备抑制肿瘤生长药物中的用途。