[发明专利]用于抗体分型的蛋白质芯片及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及蛋白质芯片，尤其涉及一种用于单克隆抗体分型的蛋白质芯片及其制备方法和应用。

背景技术

生物芯片技术是基于生物大分子(核酸、蛋白质等)相互作用的大规模并行分析方法，已成为当今生命科学研究领域发展最快的技术之一。蛋白质芯片是检测蛋白质之间相互作用的生物芯片，它是基于抗原和抗体特异性结合的原理，利用微点阵技术将多种蛋白质结合在固相基质上，从而使传统的生物学分析手段能够在极小的范围内快速完成，达到一次实验同时分析多个生物标本或检测多种指标的目的。随着制备和检测技术的日趋成熟，蛋白质芯片已经成为生物、医学研究中的重要技术平台。微孔板蛋白质芯片是将数量相对较少，经过高度纯化，具有相关生理作用的功能蛋白质固定于一个反应仓中，研究蛋白质与其他生物分子的相互作用。

抗体尤其是单克隆抗体，在有关蛋白质的功能研究、免疫学研究和药物靶点的发现以及抗体药物的研制方面有极其重要的应用。人类蛋白质组计划最重要的工作之一就是要进行人类所有蛋白质的识别，进行蛋白质的测序是一个重要的技术方案，而另外一个非常有效的方案是建立在经典的抗体识别的基础上的，即建立高覆盖的抗体组，来识别所有的人类表达蛋白。抗体药物是以细胞工程技术和基因工程技术为主体的抗体工程技术制备的药物。由于其特异性高，性质均一，可针对特定靶点制备，抗体药物应用于各种疾病治疗、特别是肿瘤治疗的前景备受关注。美国食品药品监督管理局已批准了17种治疗性抗体，其中8种抗体类药物用于肿瘤治疗(Stern M，Herrmann R，Overview of monoclonal antibodies in cancertherapy：present and promise，Critical Reviews in OncologyHematology，2005，54(1)：11-29)。

因此，高通量抗体制备技术体系的建立对于蛋白质组研究和抗体药物的开发起着推动的作用。目前主要有三种高通量抗体制备技术：即杂交瘤技术，工程抗体技术和人记忆B细胞分选技术(Traggiai E，Becker S，Subbarao K，et al.，An efficient method to make human monoclonalantibodies from memory B cells：potent neutralization of SARScoronavirus，Nat Med，2004，10(8)：871-5)。各种高通量技术制备的单克隆抗体都需要进行相关亚型的分型检测，普遍使用的方法为ELISA方法，但是ELISA检测工作量大，试剂与样品需求多。在高通量的进行抗体制备中，需要一种快速、灵敏的方法进行单克隆抗体的分型。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种用于抗体分型的蛋白质芯片，在正确进行单克隆抗体分型的同时，能减少试剂与样品用量，提高检测效率。为此，本发明还要提供该蛋白质芯片的制备方法和应用。

为了解决上述技术问题，本发明通过如下技术方案实现：

在本发明的一个方面，提供了一种用于抗体分型的蛋白质芯片，包括基片和固定于该基片上的蛋白质，所述固定于基片上的蛋白质为分型用抗体，该分型用抗体识别包括IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3、IgA和IgM的抗体亚型。

所述分型用抗体的浓度可由抗体浓度梯度芯片确定。

所述基片选材为玻片、硅片、硝酸纤维素膜、尼龙膜和高分子材料中的一种或它们的任意组合。

在本发明的另一方面，提供了一种用于抗体分型的蛋白质芯片的制备方法，包括如下步骤：

(1)构建分型用抗体浓度梯度芯片，并利用该浓度梯度芯片确定合适的分型用抗体浓度；

(2)常规清洁处理固体基片，并将基片表面进行活化使其具有吸附蛋白的活性；

(3)用芯片点样仪将分型用抗体按步骤(1)确定的合适浓度点制在基片上；

(4)37℃干燥后，0～4℃保存待用。

在本发明的另一方面，提供了一种应用上述蛋白质芯片进行抗体分型的方法，包括如下步骤：

(1)选取上述的蛋白质芯片；

(2)在适于与所选芯片上的分型用抗体进行相互作用的条件下，加入待测样品，并使其反应足够时间；

(3)洗去未与分型用抗体结合的样品后，加入经标记的抗体，并使其在合适的条件下反应足够时间，所述标记抗体可与结合在分型用抗体上的样品进行特异性结合；

(4)洗去未与样品特异性结合的标记抗体；