[发明专利]铁皮石斛试管苗的特征DNA序列及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，进一步的本发明涉及铁皮石斛试管苗的特征DNA序列及其应用。

背景技术

铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)，隶属于兰科(Orchidaceae)石斛属(Dendrobium Sw.)，为多年生附生草本，是我国传统名贵中药之一，列为上品，具有润喉消毒、生津益胃、清热养阴等功效。现代药理研究表明，铁皮石斛具有抗肿瘤、抗衰老、增强机体免疫力，扩张血管及抗血小板凝集等作用。

铁皮石斛生长环境特殊，加之长期的采挖，已成为稀有、濒危的药用植物。为拯救这一珍贵药源，近年来通过无性繁殖试管苗以及试管苗栽培的成功，实现了铁皮石斛资源的可持续开发和利用。

石斛属(Dendrobium Sw.)全世界约有1000种，我国有74种2变种，其中可做药用的种类繁多，中国药典(2000年以前版本)收载石斛为兰科(Orchidaceae)石斛属(DendrobiumSw.)铁皮石斛Dendrobium offcinale、金钗石斛D.nobile、黄草石斛D.chrysanthum、环草石斛D.loddigesii、马鞭石斛D.fimbriatum的新鲜或干燥茎。因铁皮石斛的珍贵、稀有、来源有限等，其混淆品也就屡见不鲜；另外，通过无性繁殖培植的试管苗，因植株较小，在外形上无法判断其来源的种类；还有，试管苗在繁殖和栽培的过程中，由于生态环境的改变和人们生产活动的影响，是否会发生变异等，这些现象如果依靠传统的方法进行鉴定非常困难。

随着分子生物技术的迅速发展，DNA分子标记技术在中药鉴定方面的应用已取得了许多进展(曹晖等，DNA分子指纹图谱与测序技术在中药品质研究中的现状与展望，中国中药杂志，1998，23(11)；姜玉新，石思信，张志娥等.人参、西洋参的基因组DNA的RAPD分析.特产研究，1998，(1)：5；Kitanaka S，Kunishi M，Taira T，et al.Ginsenosideproduction，tissue culture and induction of regeneration of interspecific hybridginseng(Panax ginseng×P.quinquefolium).Natural Med，1997，51：1；Ngan FN，Wang J，But PPH，et al.Application of arbitrarily primed polymerase chainreaction(AP-PCR)in commercial ginseng products.5 th International Congress ofPlant Molecular Biology，Singapore，1997)。本实验通过随机扩增多态性DNA(randomamplified polymorphic DNA，RAPD)方法，对铁皮石斛试管苗及石斛属中其它一些种类进行了研究，获得了RAPD图谱，从中筛选出铁皮石斛试管苗特异性条带，通过克隆、测序等，设计了特异性探针，应用于组培铁皮石斛及野生铁皮石斛鉴定，得到了满意的结果，为铁皮石斛的鉴定和可持续开发及利用等提供了分子生物学方面的依据。

发明内容

本发明的目的是公开铁皮石斛试管苗的特征DNA序列及其应用。

本发明一方面公开了一种铁皮石斛试管苗的特征DNA序列，它是SEQ ID NO：1的DNA序列或其互补序列。

本发明另一方面公开了上述铁皮石斛试管苗的特征DNA序列在铁皮石斛试管苗鉴定中的应用。

较佳的，利用针对上述铁皮石斛试管苗特征DNA序列的特异性探针鉴定铁皮石斛试管苗或铁皮石斛。

本发明第三方面公开了一种检测样品中是否含有铁皮石斛试管苗特征DNA序列的方法，包括下列步骤：

(1)使用针对铁皮石斛试管苗特征DNA序列的特异性探针对样品的基因进行扩增；

(2)检测是否获得相应的扩增产物。

较优的，上述铁皮石斛试管苗的特异性探针序列选自下组中的一组或多组：

(1)5′AGGAAGATGAACTTGCCGATAC 3′(SEQ ID NO：8)

和5′TCGGTCGTCCCGTCGTAT 3′(SEQ ID NO：9)；

(2)5′AAGTGCCAAATGTTGAGTC 3′(SEQ ID NO：10)

和5′CCTGGAATCTGTCGTGCT 3′(SEQ ID NO：11)