[发明专利]N－苄氧羰基异亮氨酰－δ－叔丁基谷氨酰－丙氨酰－亮氨基醛的一种液相合成法

说明书

技术领域：

本发明涉及N-苄氧羰基异亮氨酰-δ-叔丁基谷氨酰-丙氨酰-亮氨基醛【Z-Ile-Glu(OtBu)-Ala-Leu-H(PSI)】的一种合成法，特别涉及N-苄氧羰基异亮氨酰-δ-叔丁基谷氨酰-丙氨酰-亮氨基醛一种液相合成法。

背景技术：

Z-Ile-Glu(OtBu)-Ala-Leu-H(PSI)是与人类疾病相关重要蛋白酶的抑制剂，在治疗骨髓性白血病，肿瘤等方面起重要作用(Ref1：British Journal ofHaematology.，2001，113，126.Ref2：Arch Biochem Biophys.，1995，317，69.Ref3：J.Biol.Chem.，2002，277，2330)。在以往报道各种肽醛的固相合成方法成本较高，不利于肽醛合成的推广。

发明内容：

本发明的目的是提供一种液相合成Z-Ile-Glu(OtBu)-Ala-Leu-H的方法，解决目前采用固相合成法成本较高，液相合成法复杂的技术问题。本发明的技术方案为：N-苄氧羰基异亮氨酰-δ-叔丁基谷氨酰-丙氨酰-亮氨基醛的一种液相合成法，包括以下步骤：

a.以Boc-Leu-OH等为原料合成C-端以硫苄酯为保护基的肽链Z-Ile-Glu(OtBu)-Ala-Leu-SBzl；

b.在上述产物的有机溶剂中加入10％Pd-C和Et₃SiH，在20～35℃反应6～9小时后得到肽醛。有机溶剂为丙酮或四氢呋喃。

具体的反应步骤为：

1、Boc-Leu-OH溶解到适量的有机溶剂中，加入HOBt、NMM或DIEA和苄硫醇，冰浴下搅拌5～15min，加入DCC，20～30min后撤掉冰浴，室温搅拌过夜。合成的Boc-Leu-SBzl经2mol/L二氧六环盐酸气脱保护得到H-Leu-SBzl·HCl。有机溶剂为四氢呋喃或N，N-二甲基甲酰胺或N，N-二甲基乙酰胺溶剂中的一种。

2、Z-Ile-OH和H-Glu(OtBu)-OMe·HCl溶解到适量的有机溶剂中，加入HOBt和NMM，冰浴下搅拌5～15min，加入DCC，20～30min后撤掉冰浴，室温搅拌过夜，得到Z-Ile-Glu(OtBu)-OMe。产物经甲醇和四氢呋喃的一种或两种溶解后用饱和氢氧化锂水溶液水解，得到Z-Ile-Glu(OtBu)-OH。有机溶剂为四氢呋喃或N，N-二甲基甲酰胺或N，N-二甲基乙酰胺溶剂中的一种。

3、Z-Ile-Glu(OtBu)-OH和H-Ala-OMe·HCl溶解到适量的有机溶剂中，加入HOBt和NMM，冰浴下搅拌5～15min，加入DCC，20～30min后撤掉冰浴，室温搅拌过夜，得到Z-Ile-Glu(OtBu)-Ala-OMe。产物经甲醇和四氢呋喃的一种或两种溶解后用饱和氢氧化锂水溶液水解，得到Z-Ile-Glu(OtBu)-Ala-OH。有机溶剂为四氢呋喃或N，N-二甲基甲酰胺或N，N-二甲基乙酰胺溶剂中的一种。

4、Z-Ile-Glu(OtBu)-Ala-OH和H-Leu-SBzl·HCl溶解到适量的有机溶剂中，加入HOBt和NMM，冰浴下搅拌5～15min，加入DCC，20～30min后撤掉冰浴，室温搅拌过夜，得到Z-Ile-Glu(OtBu)-Ala-Leu-SBzl。有机溶剂为四氢呋喃或N，N-二甲基甲酰胺或N，N-二甲基乙酰胺溶剂中的一种。

5、Z-Ile-Glu(OtBu)-Ala-Leu-SBzl经10％Pd-C和Et₃SiH还原得到Z-Ile-Glu(OtBu)-Ala-Leu-H。溶剂为丙酮或四氢呋喃。

本发明中一些常用的缩写具有以下含义：

Boc：叔丁氧羰基

DMF：N，N-二甲基甲酰胺

HOBt：1-羟基苯并三唑

NMM：N-甲基吗啡啉

DIEA：二异丙基乙胺

DCC：二环己基碳二亚胺

Et₃SiH：三乙基硅烷

Boc-Leu-OH：N-叔丁氧羰基亮氨酸

Boc-Leu-SBzl：N-叔丁氧羰基亮氨酸硫苄酯

H-Leu-SBzl·HCl：亮氨酸硫苄酯盐酸盐

Z-Ile-OH：N-苄氧羰基异亮氨酸

H-Glu(OtBu)-OMe·HCl：δ-叔丁基谷氨酸甲酯盐酸盐

Z-Ile-Glu(OtBu)-OMe：N-苄氧羰基异亮氨酰-δ-叔丁基谷氨酸甲酯