[发明专利]组织蜡块中目标组织碳芯多维定位的方法及产品

说明书

一、技术领域

本发明涉及一种对照苏木素伊红染色切片，在组织蜡块中精确定位目标组织细胞和钻取组织芯的方法，更具体地，涉及一种组织蜡块中目标组织碳芯定位技术精确获得肿瘤组织的方法。

二、背景技术

随着组织学、病理学的发展，人们对人体或其他动植物的认识，从解剖学上的器官水平向组织、细胞水平发展。但由于完整的器官很难用显微镜观察，因此需要把器官切成很薄的切片进行染色观察，为了解决这个问题，出现了组织学技术。该方法的原理是通过把器官切成小块组织，用福尔马林固定后，利用酒精脱去该组织中的水分，再浸入二甲苯或苯溶液脱去酒精，最后组织块浸入熔化石蜡溶液中脱去二甲苯，放入模具内用石蜡溶液进行包埋，冷却后形成石蜡块。该石蜡块利用切片机进行切片，把蜡片裱于玻璃片上再进行烤片、脱蜡，染色、封片后就可以用显微镜进行观察研究。目前，组织学技术不仅是单纯染色显微镜观察，还出现了各种特殊染色、免疫组织化学技术、原位杂交技术、原位PCR技术。

近年来随着基因组学、蛋白组学研究发展，人们研究的生理和疾病已逐步从分子水平向细胞水平及组织水平发展，因此，如何利用组织开展研究，是目前研究中所要解决问题之一。采用传统组织技术的研究方法，由于组织标本需要量大，实验工作量大，难以适应研究的学要。近年来，出现了组织微阵列芯片技术，解决了上述问题。该技术将数十个、数百个乃至上千个小的组织片整齐地排列在某一载体上(通常是载玻片)而制作成微缩组织切片，其基本操作程序(如图1所示)包括：设计并拟定组织芯片的分类系列、核对组织或有关疾病的病理诊断、组织定位、阵列蜡块的制作、再从源蜡块上钻取组织并转移到空白石蜡块的相应位置、组织芯片切片。组织芯片的特点有：体积小、信息含量大、高通量；减少或避免了对原始组织蜡块的破坏；组织样本的定位准确，减少无效组织；批量制作及可能的结果分析自动化；不同来源的病例的处理、染色和分析条件相同。

组织芯片技术的发明给组织学、病理学的发展带来了极大促进。该技术的难点就是组织定位和从源病理蜡块上钻取组织芯，这步操作失误就会出现“无效组织”问题。“无效组织”问题是指对最终的组织芯片进行苏木苏伊红染色病理复诊确认每一点是否与阵列设计所需的组织类型一致，如果该点为间质纤维血管组织而不是计划设计的肿瘤组织，则该点组织就为“无效组织”不能被试验分析，如果“无效组织”占组织芯片中的点数较多，就会极大降低组织芯片的应用价值。造成“无效组织”的其主要原因为，组织蜡块在制作染色切片时，石蜡块先在-20℃冰箱预冷，然后进行石蜡组织切片，其厚度只有4～6微米受到刀片的挤压会产生不同程度的收缩，再置于39℃～44℃较高的水温中展片切片又会不同程度的放大，这样最后制作好的染色切片与石蜡中组织形态大小有差异，病理专家在染色切片上诊断和标记肿瘤组织的范围，参照染色切片上圈定的范围与病理蜡块中的组织进行比较确定肿瘤组织的位置，这时就很容易发生失误将原本排除在外的非肿瘤组织选入。

三、发明内容

本发明的目的是提供一种高效、简便、低成本，利用碳芯组织定位技术精确获得目标组织的方法，以克服上述中的不足之处。本发明的主要构思是，组织在蜡块中只占一部分而周围都是空白石蜡，在空白石蜡固定的位置上放置3～5个不同直径的碳芯，这些碳芯不影响组织切片，在进行切片时如果组织受到挤压变形那么固定位置的碳芯也会产生相同的变形，在制作成HE染色切片后，病理复诊在其上用标记笔将目标肿瘤组织圈出，根据圈出部位到定位碳芯的距离及碳芯的位置变量，通过人工估算或计算机图像扫描采集软件对HE染色片和石蜡块进行比对很容易在石蜡块上确定目标肿瘤组织的位置，这样就能精确的取到目标肿瘤组织，极大提高组织芯片的产品合格率。

炭芯的制备方法：首先选择优质木炭，将其切割成15×15×15毫米大小的块状，然后放入组织脱水框中按照常规组织脱水、透明、浸蜡包埋程序处理，即按以下试剂流程处理：①无水酒精1缸1小时，②无水酒精2缸2小时，③二甲苯1缸1小时，④二甲苯2缸2小时，⑤62度石蜡1缸中2小时，⑥62度石蜡2缸中2小时，最后在石蜡包埋机上制作成木炭蜡块，用不同直径的空心针制作不同直径的炭芯，常用炭芯的直径为0.6毫米，1.0毫米，1.5毫米，2.0毫米，2.5毫米或3.0毫米。这些作好的炭芯可以用于组织块中目标肿瘤组织的定位，在组织蜡块上放置碳芯的方法可以有以下2种：

1、模具种植包埋碳芯法