[发明专利]GST－hDSL重组蛋白的制备方法

权利要求书

1、一种GST-hDSL重组蛋白的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

第一步，构建重组表达质粒pGEX-2T-hDSL；

第二步，诱导表达重组表达质粒pGEX-2T-hDSL；

第三步，将表达产物依次经变性，复性，离心，冲洗，洗脱后纯化得到GST-hDSL重组蛋白的。

2、如权利要求1所述的GST-hDSL重组蛋白的制备方法，其特征是，所述第一步构建重组表达质粒pGEX-2T-hDSL，具体包括如下步骤：

a.以上游5’-cgggatccctccacacagattctcctg-3’，下游5’-cggaattcttagatcggctctgtgcagtag-3’为反应引物，以质粒pBlue-hDLL-1为模板，对hDSL区进行预变性，变性，退火，延伸，30个循环，最后再延伸完成聚合酶链式反应扩增；

b.经琼脂糖电泳分离聚合酶链式反应产物；

c.割胶回收目的产物，该目的产物为hDSL序列，用限制性内切酶EcoR I、BamH I双酶切目的产物和原核表达质粒pGEX-2T，含有GST结构，连接后转化入DH5α，构建重组表达质粒pGEX-2T-hDSL。

3、如权利要求2所述的GST-hDSL重组蛋白的制备方法，其特征是，所述聚合酶链式反应的反应条件是：94℃预变性5min，94℃变性30s，65℃退火45s，72℃延伸1min，30个循环，最后72℃延伸10min。

4、如权利要求1所述的GST-hDSL重组蛋白的制备方法，其特征是，所述第二步诱导表达重组表达质粒pGEX-2T-hDSL中，包括具体如下步骤：

a.挑选经测序证实无突变且读框正确的阳性克隆；

b.用上述重组表达质粒pGEX-2T-hDSL转化大肠杆菌E.coliDH5α菌株；

c.于37℃培养至A_600nm为0.4小时～0.6小时，加入浓度为0.1mmol/L的异丙基-b-D-硫代半乳糖苷至其终，诱导表达4小时-6小时，收获细菌。

5、如权利要求1所述的GST-hDSL重组蛋白的制备方法，其特征是，所述第三步具体包括如下步骤：

a.将表达产物以包涵体形式存在于沉淀中，将表达产物经8mol/L-10mol/L尿素、pH7-pH9变性液溶解；

b.用pH9-pH11的复性液及pH7-pH9稀释液缓慢复性；

c.将复性所得产物离心，取上清以阴离子交换柱纯化；

d.用pH7-pH9的洗脱液冲洗；

e.用0.5M-1M NaCl洗脱，最终纯化得到GST-hDSL重组蛋白。