[发明专利]冠心病检测方法和试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学和医学领域。更具体地涉及连接附着分子(junctionaladhesion molecule，F11R)的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism，SNP)及其与动脉粥样硬化和/或冠心病的相关性。本发明还涉及检测这些SNP的方法和试剂盒。

背景技术

动脉粥样硬化是一种常见的进行性动脉疾病，病变主要累及中等大小的肌层动脉，动脉内膜脂质沉积，平滑肌细胞增生，形成局限性斑块，可使动脉壁变硬，严重时斑块破裂导致血栓、栓塞、出血，受累管腔部分或完全闭塞，临床表现为动脉粥样硬化血管并发症的发生，老年患者中最常见和最严重的血管并发症是动脉粥样硬化和/或冠心病(不稳定性心绞痛和心肌梗塞)和脑卒中。

动脉粥样硬化病变的发生和发展主要经历了四个循序渐进的病理过程：

1.脂质浸润前期内膜改变：内皮损伤

2.脂质条纹：泡沫细胞、T淋巴细胞聚集，平滑肌细胞增生。

3.纤维斑块：平滑肌纤维化，形成纤维帽。

4.复合病变：斑块钙化、破裂、溃疡，中膜病变。

动脉粥样硬化的病因及发病机制十分复杂，是动脉壁的细胞、细胞外基质、血液成分(特别是单核细胞、血小板和LDL)、局部血流动力学、环境及遗传因素之间一系列复杂作用的结果，因而病因并非是单一因素的。

动脉粥样硬化作为多基因疾病，发病原因不仅涉及到多个作用不同的基因，而且还涉及到基因-基因、基因-环境的相互作用。现在关于动脉粥样硬化发病机理的学说有很多，如渗入脂质学说、血管内膜损伤学说、炎症反应学说、氧化-抗氧化学说及血栓形成学说。所有这些学说都涉及到不同的生物通路，但是现在还没有一种学说能够在遗传学和分子生物学上得到完整的解释。

多年来，基于对动脉粥样硬化致病危险因素的长期研究，科学家们针对这些危险因素开展了大量的工作。目前为止，已经发现了血管紧张素I转化酶(ACE)和MTHFR的某些插入、缺失和突变可能使动脉粥样硬化和/或冠心病致病的潜在危险因素。前者使血压调节中发挥重要功能的酶类之一，后者是一种与半胱氨酸代谢有关的酶。

另外，德国科学家最近证实，AT1受体的表达水平与血管受损过程紧密联系：ACE抑制剂会减少AT1受体的激活，从而改善血管功能不良、有效的抑制动脉粥样硬化的发生和发展。

但长期以来，国内外研究较多地集中于脂质代谢通路中相关基因的突变及表达，如：副氧酶、脂蛋白脂肪酶、肝脂肪酶等。在对内源性一氧化氮合成酶(eNOS)的研究中，现在已有一些研究工作表明eNOS与动脉粥样硬化的紧密关联。另有美国科学家提出了炎症机制在动脉粥样硬化的形成中的作用，并在小鼠试验中得到了一定的证实。

近年来，单核苷酸多态性(SNP)和单倍型(haplotype)概念在多基因疾病研究中的广泛运用，为在分子水平上研究动脉粥样硬化的发生和发展的机制开辟了全新的思路。同时，高通量、低成本的SNP检测手段的不断出现也为SNP大规模快速分型提供了可能。

日本科学家利用大规模的病例-对照研究对9万多个相关基因SNPs进行了关联分析，发现了一个50KB的单倍型区域与心肌梗死密切相关，其中包括LTA(lymphotoxin-α)，NFKBIL1和BAT1等的多个SNP位点。

在另一研究中，虽然P-选择素(P-selectin)中S290N和N562D各自与心肌梗塞都没有独立相关性，但它们构成的单倍型却与心肌梗塞显著相关。

此外，SNP的存在与否以及等位基因频率存在人种及地域的差异，这就提示多基因疾病遗传异质性的存在，即同一疾病或性状在不同的人群中可能是不同的遗传因素造成的。在对凝血因子V基因的研究中，中国人群中未能发现国外报道的与白人女性心肌梗塞发病具有相关性的VLeiden突变，却发现了一个新的SNP-G/A1628(Arg485Lys)突变与APCR及动脉粥样硬化和/或冠心病相关，凝血因子V基因可能是中国人群动脉粥样硬化的一个易感基因。

另外，不同人群中SNP及其单倍型的类型和频率存在的这种差异可能与不同人群对药物及环境因素的反应性不同密切相关。

在过去的50多年来，大规模的流行病学调查和遗传研究已经对冠状动脉粥样硬化这一复杂疾病做了一系列的研究，发现了一些易感基因与动脉粥样硬化相关，例如ABCA1、CYBA、ApoE、LDLR等。更多的与动脉粥样硬化相关继续在发现和验证中。