[发明专利]扶正化瘀植物药中虫草菌粉原料指纹图谱质量控制方法

说明书

技术领域

本发明属虫草菌粉原料质量控制方法领域，特别是涉及一种扶正化瘀植物药中虫草菌粉原料指纹图谱质量控制方法。

背景技术

冬虫夏草为麦角菌科真菌冬虫夏草菌寄生在蝙蝠蛾科昆虫幼虫上的子座及幼虫尸体的复合体，是久享盛誉的名贵中药。它分布于中国的青海、西藏、四川等地，存在于中国西北和西南部海拔3000-4000m山区的多草的土壤中。露在土壤表面部分为真菌的子实体，长3-6cm，色黑，形如刀刃。埋在土中的虫体部分长2.5-4m，黄色至深棕色。因其形态随季节发独特变化，科季为虫形夏季呈草状，故在我国称之为“冬虫夏草”。冬虫夏草早在《本草从新》中已有记载，《本草纲目拾遗》中记载尤详。性味甘，平，归肺、肾经。补肺益肾，止血，化痰。用于久咳虚喘，劳嗽咯血，阳痿遗精，腰膝酸痛。

近年来，国内报道与虫草有关的菌种达10个属的30多种^[17][18]。例如：

(1)冬虫夏草头孢菌(Cephalosporium sinensis)从青海产冬虫夏草中分离得到，属半知菌类，丛梗孢目，丛梗孢科，头孢霉族，头孢霉屑。(2)蝙蝠蛾拟青霉(Paecilomyces hepiali)从青海化隆县产冬虫夏草上分离得到，属半知菌类，丛梗孢目，丛梗孢科，曲霉族，瓶梗青霉属。(3)蝙蝠蛾被孢霉(Mortierella hepiali)从四川汶川产冬虫夏草上分离得到，属藻状菌纲，毛霉目，被孢霉科，被孢霉屑。(4)中国拟青霉(Paecilomyees sinensis)从四川康定产冬虫夏草上分离得到，属半知菌类，丛梗孢目，丛梗孢科，被孢霉屑。(5)其它还有虫草多毛孢(Hirsutella hepiti)、中国被毛孢(Hirsutella sinensis)、蝙蝠蛾柱霉(Scytalidium hepiale)、中国弯颈霉(Tolypocladium sinensis)、中国金孢霉(Chrysosporium sinensis)、葡萄穗霉属(Stachybotry)等

本发明生产的虫草菌粉即是蝙蝠蛾拟青霉(Paecilomyces hepiali)Cs-4菌株深层培养的发酵产物。本品为浅棕褐色的粉末；气香，味微味。Cs-4菌株从青海化隆县产冬虫夏草上分离得到，属半知菌类，丛梗孢目，丛梗孢科，曲霉族，瓶梗青霉属。

关于虫草菌粉的的制备，中国医学科院药物研究所杨云鹏、岳德超等最早对青海虫草分离的蝙蝠蛾拟青霉(Paecilomyces hepiali)Cs-4菌株及其深层培养其进行了研究。中国中医研究院中药研究所，戴如琴等后来又对从云南天然虫草中分离出来的蝙蝠蛾拟青霉新种((Paecilomyces hepiali chen et Dai.sp.nov)进行了研究。

腺苷含量是评价冬虫夏草内在质量的主要指标，目前核苷类物质的分析方法有HPLC法、薄层色谱法、高效毛细管电泳法等。夏文娟等用HPLC法分析了13个产地冬虫夏草腺苷的含量，结果13个产地冬虫夏草的腺苷含量为142.5～396.6ug/g，其中藏草腺苷含量高于川草，在川草中，炉草腺苷含量高于滇草，灌草最低。Li等用高效毛细管电泳法测定天然和人工冬虫夏草中核苷成分的含量，结果显示人工虫草的核苷含量明显高于天然虫草；新采集的天然虫草中核苷类物质含量极低，而采集日久者核苷成分含量较高，因此腺苷在天然冬虫夏草质量控制中的具有应用价值。米莉莉等建立了对冬虫夏草一次进样使核苷类成分得到理想分离的HPLC定量分析方法。

关于虫草属真菌中核苷类化学成分的研究报道较多，主要集中在冬虫夏草、蛹虫草及其发酵菌丝体，至今已报道从冬虫夏草及发酵菌丝体中分离鉴定有11个核苷类化合物^[13]，而对冬虫夏草无性型菌株的发酵液中核苷类成分的研究则较少。丁婷等^[12]用HPLC法对冬虫夏草及其无性型菌株发酵液中核苷类成分进行了定量分析。结果表明，中国被毛孢RCEF0273发酵液中含有3种核苷标样，分别为腺苷、尿苷、鸟苷，其含量均高于对照品冬虫夏草生药。

姜丽霞等^[14]用HPLC对四种人工培养冬虫夏草发酵菌丝体中主要核苷及核酸碱基进行了测定，着重对其中的腺苷成分作了提取溶剂比较及回收率试验。