[发明专利]非甲醇诱导型毕赤酵母蛋白表达系统及其用途

权利要求书

1.一种毕赤酵母表达载体，其特征在于，其启动子序列为酵母的甲醛脱氢酶启动子FLD1序列。

2.如权利要求1所述的毕赤酵母表达载体，其特征在于，所述启动子序列为SEQ ID NO：1。

3.如权利要求1或2所述的毕赤酵母表达载体，其特征在于，所述表达载体为分泌型表达载体或胞内表达载体。

4.如权利要求3所述的毕赤酵母表达载体，其特征在于，所述分泌型表达载体为pFLDZαA，所述胞内表达载体为pFLDZA。

5.权利要求1-4中任一权利要求所述毕赤酵母表达载体的制备方法，包括下列步骤：

(a)克隆毕赤酵母FLD1蛋白结构基因与调控序列；

(b)将克隆产物采用合适的限制性酶切位点切割后，与去除乙醇氧化酶启动子的毕赤酵母表达载体pPICZA或pPICZαA连接。

6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，其中克隆毕赤酵母FLD1蛋白结构基因与调控序列时，采用PCR方法进行克隆，PCR所用引物选自下组：

1)PFLD1：5’-ACGAGATCTGCATGCAGGAATCTCTGGCACG-3；

2)PFLD2：5’-CTGGGATCC GAATTCTGTGAATATCAAGAATTGTATGAAC-3’；

3)PFLD1：5’-ACGAGATCTGCATGCAGGAATCTCTGGCACG-3；

4)PFLD2a：GCA CATATGTGAATATCAAGAATTGTATGAAC-3’；

5)FLD11：5’-ACT GGATCC CATATGTCTACCGAAGGTCAAATCATCAAATGTA

AGGCA GCT-3’；

6)FLD22：5’-TCA GGGCCC TTA GTG CAT AGT AAT CAC AGC-3’。

7.如权利要求5或6所述的制备方法，其特征在于，其中克隆获得的FLD1蛋白的核苷酸序列为SEQ ID NO：2。

8.权利要求1-4中任一权利要求所述毕赤酵母表达载体用于表达生产外源蛋白。

9.一种毕赤酵母表达系统，其特征在于，其表达载体为权利要求1-4中任一权利要求所述毕赤酵母表达载体，宿主为毕赤酵母P.pastoris，表达诱导物为无毒氮源成分。

10.如权利要求9所述的毕赤酵母表达系统，其特征在于，所述无毒氮源成分为烷基化胺。

11.如权利要求10所述的毕赤酵母表达系统，其特征在于，所述烷基化胺选自甲胺或胆碱。

12.权利要求9-11中任一权利要求所述的毕赤酵母表达系统用于表达或生产医药或者食品用途的重组蛋白质。