[发明专利]一种豹皮香菇0820菌种的分子特异标记及其获得方法与应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种豹皮香菇0820菌种的分子特异标记及其获 得方法与应用。

背景技术

我国香菇产量已从1983年的1.95万吨迅速发展到2005年的242万吨，占全球香 菇总产量的70％以上，改写了世界食用菌产量的排行榜，并不断缩小与排行第一的双孢蘑 菇产量差距，有专家预测，由于中国香菇产业的迅猛发展，在近10年内其将成为世界产 量最高的食用菌。中国香菇以其惊人的发展速度，优质的品质及低廉的成本为世界菇业人 士瞩目，中国香菇已风靡世界。

优质菌种在香菇单产和质量中的贡献率举足轻重，这决定了香菇菌种在香菇产业中的 重要地位。1999年我国签署了《国际植物新品种保护法》，这不仅要求我们尊重其它国家 的品种知识产权，同时也要加强保护我们国家自己的品种知识产权，为了建立食用菌新品 种登记制度来真正保护我国的品种产权，必须首先建立成熟的品种鉴定技术，为新品种登 记奠定基础。尤其日本2004年4月1日开始实行《种苗法修正案》，对我国食用菌尤其 是香菇的出口构成了极大的威胁。就国内而言，香菇栽培菌种“同种异名，异种同名”的 现象，不仅给菇农带来了极大的损失，影响了他们的栽培积极性，也极大地影响了中国香 菇的快速发展；而且，随着大规模的工厂化栽培方式的出现，对香菇栽培菌株质量的要求 越来越高，需要发展更为简便、快速、准确的菌株鉴定技术，以保证每批次的用种都准确 无误。

随着分子生物学技术的快速发展，特别是分子标记和基因标记技术的建立与成熟，为 发展简便、快速、准确的菌株鉴定技术提供了有效手段。SCAR(Sequence Characterized Amplified Region)标记是一种十分稳定的分子标记，在应用上具有迅速、简便、低成本 的特点，本发明建立了豹皮香菇0820菌种的SCAR分子标记，能对豹皮香菇0820菌种进 行快速鉴定。

发明内容

本发明的目的是为了能对豹皮香菇0820菌种进行简便、快速、准确的鉴定和检测， 提供了一种豹皮香菇0820菌种的分子标记，同时提供了这种豹皮香菇0820菌种的分子标 记的获得方法。

本发明提供的一种豹皮香菇0820菌种的分子特异标记为400bp大小的特异片段，其 特异性PCR扩增引物对序列为： 5′TGGCATGAGCATCTGGTCTG3′和 5′CGTATCGTTTAGGAAGGGTG3′。

本发明提供的一种豹皮香菇0820菌种的分子特异标记的获得方法，包括下列步骤：

(1)菌丝培养和基因组DNA的提取。

(2)香菇菌株豹皮香菇0820菌株的特异DNA片断的获得：

采用PCR技术，经过大量的筛选试验，在采用简单重复序列为引物获得了香菇菌株507 的特异DNA片断，将该片段克隆测序。

(3)特异PCR扩增引物的获得：

以得到的DNA序列为基础，设计特异PCR扩增引物，引物对的序列如下： 5′TGGCATGAGCATCTGGTCTG3′和5′CGTATCGTTTAGGAAGGGTG3′。

(4)用特异PCR扩增引物对对豹皮香菇0820菌株进行SCAR-PCR扩增。

(5)电泳检测可见400bp大小的特异片段(图1)。而其它香菇菌种均未见特异性片断。

对114(为生产用种)个收集自全国各地的香菇生产用菌种及少数野生种共164个菌 株进行SCAR扩增。164个菌种中有豹皮香菇0820菌株具有专一扩增条带。

根据采用这一对特殊引物进行PCR扩增，以能否产生400bpDNA片段作为对豹皮香菇 0820菌株进行鉴定和检测的依据。

该检测方法与常规形态学检测、拮抗试验、出菇试验相比，具有检测时间短，准确性 高的优点。该检测所需时间只需要2-3天，而常规的拮抗试验所需时间至少需要两周时 间，出菇试验则需要至少3个月的时间；该方法在所收集的我国164个香菇生产菌株中具 有豹皮香菇0820菌株的专一性。

附图说明

图1豹皮香菇0820菌株专用检测引物对香菇菌株进行SCAR-PCR扩增结果