[发明专利]Hpd3cell、制备方法及其用于构建丝状噬菌体单链抗体库的用途

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学和医学领域。具体地说，本发明涉及一种Hpd3cell细胞、制备方法和用途。Hpd3cell为含有缺乏基因III的辅助噬菌体基因组的F因子阳性细菌，已于2007年5月25日在中国科学院微生物研究所保藏，分类命名为大肠埃希氏杆菌(EscherichiaColi)，菌种保藏编号为CGMCC2057。可以用于构建单链抗体噬菌体文库以pIII为基础的新的丝状噬菌体抗体展示库，提供了一种制备多肽展示的噬菌粒颗粒的方法。

背景技术

pIII为基础的噬菌体展示已经被广泛用于筛选并获得各种各样的抗原的特异抗体。为了增加抗体库的展示水平，Rondot S，等采用基因III缺失的辅助噬菌体(命名为Hyperphage，Rondot，S.，J.Koch，F.Breitling，and S.Dubel.2001.A helper phage to improve single-chainantibody presentation in phage display.Nat.Biotechnol.19：75-78.)去拯救编码抗体-pIII融合蛋白。用该方法，scFv展示在噬菌粒颗粒表面的数量可以增加100倍。但是，Hyperphage的方法非常繁琐，需要构建一个大肠杆菌包装细胞系(DH5α/pIII)去提供pIII用于辅助噬菌体制备，以免在辅助噬菌体的产生过程中有质粒的污染。此外Hyperphage的产量(大约1.34×109/ml)相当低。还有就是用于构建单链抗体噬菌体展示库的噬菌粒的蛋白III所用启动子为野生型Lac启动子并不是绝对严格的，pIII可以在缺乏IPTG的情况下产生从而诱导pIII抵抗辅助噬菌体超感染(Boeke，J.D.，P.Model，and N.D.Zinder.1982.Effects ofbacteriophage f1 gene III protein on the host cell membrane.Mol.Gen.Genet.186：185-192.)。因此，葡萄糖，pLac抑制子(repressor)经常被添加到培养基中去抑制pIII表达(KrebberA.，J.Burmester，and A.Pluckthun.1996.Inclusion of an upstream transcriptional terminator inphage display vectors abolishes background expression of toxic fusionswith coat protein g3p.Gene 178：71-74.)。为了解决以上问题，本发明人采用含有基因III缺失的辅助噬菌体基因组(VCSM13d3)的F⁺大肠杆菌(TG1)去构建pIII为基础的噬菌体单链抗体库。

发明内容

本发明目的是提供一种Hpd3cell细胞。

本发明目的还提供一种上述Hpd3cell细胞的制备方法。

本发明另一目的是提供一种上述Hpd3cell细胞的用途。

本发明的Hpd3cell细胞，其菌种保藏编号为CGMCC2057。是一种含有缺乏基因III的辅助噬菌体基因组的F因子阳性大肠埃希氏杆菌；所述的辅助丝状噬菌体基因组指包含了除pIII蛋白编码序列外的辅助丝状噬菌体基因组序列，该基因组上携带和不携带抗性标记。所述的Hpd3cell细胞，所述的抗性标记是指能表达抑制或降解氨苄抗生素、卡那霉素、氯霉素或四环素等。

本发明的Hpd3cell细胞的制备方法，是由缺少基因III的辅助噬

菌体基因组(VCSM13d3)转化F因子阳性的细菌获得。

本发明的Hpd3cell细胞的用途，是用于构建以pIII为基础的单链抗体噬菌体库。将编码scFv-pIII融合蛋白的噬菌粒转化Hpd3cell，可以高效制备噬菌粒颗粒，产生的噬菌粒颗粒滴度高达1.2×1011cfu/ml培养基，并使单链抗体在噬菌粒颗粒上获得高水平展示。采用Hpd3cell构建单链抗体噬菌体文库，可以充分提高特异性富集效率。此外，采用Hpd3cell还可以克服pIII抗性。因此，Hpd3cell可以提高噬菌体抗体库的富集效率并增加获得同种抗原的不同抗体的效率。

附图说明

图1是一种Hpd3cell设计图。

图2是Hpd3cell增加单链抗体展示水平图。

图3是Hpd3cell增强筛选效率示意图。