[发明专利]夏枯草活性部位及其在制备药物组合物中的应用

说明书

技术领域

本发明属中医药领域，具体涉及中草药夏枯草活性部位及提取分离技术，和在制备 抗结肠癌的药物组合物中的应用。

背景技术

夏枯草始载于《神农本草经》，是最常用的中药材之一，现载于2005年版《中国药 典》一部，为唇形科植物夏枯草(Prunella.vulgaris L.)的干燥果穗，具有清火，明目， 散结，消肿之功效。现代药理学研究发现夏枯草具有降压、降血糖、细胞毒、抗病毒、 抗菌、抗氧化、抗过敏、免疫活性和抗炎活性等多种作用。夏枯草中主要含有三萜类(熊 果酸、齐墩果酸)、甾体类(β-谷甾醇、豆甾醇)、黄酮类(芸香苷、槲皮素)、香豆素 类(伞型酮、莨菪亭)、苯丙素类(咖啡酸、迷迭香酸)、糖类(葡萄糖、果糖)、挥发 油(1，8-桉油精、β-蒎烯)、无机盐(KCl)等成分。其中夏枯草皂苷具有明显抗艾滋 病毒作用；熊果酸及衍生物对细胞P₃₈₈、L₁₂₁₀和人体肺肿瘤细胞A-549均具有显著的细 胞毒作用；夏枯草总苷与降压作用有关；酚酸类成分具抗炎、镇痛作用，对类风湿性关 节炎具确切的治疗作用，且具有增强免疫抑制作用。从夏枯草中提出的多糖具显著的刺 激免疫作用。夏枯草中的鞣质可能是其抗HIV-1gp41的6-螺旋束构型的主要成分。夏 枯草水提物200mg/ml对HIV-1蛋白酶有显著抑制作用(>90％)，此外水提物还具免疫 调节和抗炎活性。醇提物可对抗肾上腺素升高血糖作用，具有改善糖耐量、增加肝糖元 合成的作用，还具免疫抑制活性。夏枯草有机提取物(OF)(25.7％w/w的迷迭香酸) 有消除DPPH的活性，体外试验有抑制人LDL Cu(II)-mediated氧化，对暴露于的tert- 丁基过氧化物或Cu(II)和Fe(III)离子下的大鼠线粒体和肝细胞有保护作用。OF可能 还有抑制溶血和减少通过5-lipoxygenase途径产生的牛PMNL中LTB的生成量。另有试 验证明其有抑制HaCaT细胞和小鼠表皮纤维原细胞增生作用，中剂量的OF可抗革兰氏 阳性菌。临床上以单味夏枯草制得的夏枯草注射液用以治疗肺癌胸水、白血病、中晚期 胃、大肠癌等疗效显著。但迄今未见夏枯草抗结肠癌活性成分研究的报道。

发明内容

本发明的目的是提供中药夏枯草(Prunella.vulgaris L.)的活性部位及其提取方法。

本发明的另一目的是将上述活性部位作为药物制剂的原料。

本发明还有一个目的是提供上述活性部位在制备防治结肠癌及结肠癌转移药物中 的应用。

本发明对传统中药夏枯草进行提取分离，获得药效作用明确，具有药用价值的抗结 肠癌活性部位。

本发明公开的夏枯草活性部位以夏枯草药材为原料，经水提后通过一系列分离纯化 技术获得不同的极性部位；然后通过培养人结肠癌细胞，将分离所得的样品在细胞水平 上进行生物活性的检测、确定后的具有药理作用的夏枯草有效部位。

所述的夏枯草活性部位，占夏枯草药材的2.7‰(g/g)。对所述活性部位进行HPLC 指纹图谱分析，条件为：Diamonsil C₁₈柱(200mm×4.6mm，5μm)；流动相：A：甲醇， B：乙腈，C:0.5％醋酸水溶液，线性梯度洗脱，0min:0.5％B，97.5％C；10min:10％B，80％C； 20min:25％B，75％C；30min:30％B，70％C；50min:97.5％B，2.5％C；流速：0～20min： 0.7ml/min；30min:1ml/min；柱温：25℃；检测波长：247nm；以迷迭香酸为参照，结果 显示，夏枯草活性部位的HPLC图谱(图4)有3个共有峰，其保留时间范围为：共有峰 1约为15.56～15.91min，共有峰2约为21.30～21.43min，共有峰3约为30.90～31.43mim。 各批次药材所得活性部位及所含成分相似度较高，均大于0.9。

表1是10批夏枯草活性部位HPLC指纹图谱保留时间(min)。

表1

上述活性部位可作为药物制剂的原料。

本发明公开的夏枯草活性部位通过下述方法制备：

1、取夏枯草(全草)用水煎煮提取，水提取液过滤，浓缩后加不同浓度的乙醇沉淀， 取上清液浓缩至一定相对密度的清膏，依次加入酸、碱溶液，冷藏，滤过，得夏枯草提 取液；或，