[发明专利]蛋白质二硫键异构酶A3及其抗体在检测肝癌中的应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术检测领域，具体地说，本发明涉及一种蛋白质二硫键异构酶A3及其抗体在检测肝癌中的应用。

背景技术

肝癌是一种严重危害人类的疾病。西方发达国家肝癌的发病率较低，国际上对肝癌的基础研究仍较为薄弱，而我国是肝癌高发国家，发病率和死亡率呈现上升趋势，且发病年龄构成年轻化，每年用于肝癌治疗的医疗支出大为增加，肝癌成了严重危害我国人民生命财产安全的头号敌人，并且是影响社会经济发展的一个重要因素，加大力度进行我国肝癌的基础研究具有战略意义，而分离和鉴定新的肝癌相关基因是目前肝癌基础研究中的前沿课题。

到目前为止，已有不下20种的基因异常表达被确定与肝癌的发生发展有关，但已确定的肝癌相关基因在肝癌中的异常表达率并不高，肝癌的发病机制至今仍未阐明，肝癌的早期诊断率仍有待提高。此外，传统的肝癌手术加化疗以及近年来配合使用的多种基因治疗方法仍没有明显提高肝癌患者的生存率，因而寻找新的肝癌相关基因尤其是肝癌高表达基因对于探讨肝癌的发病机制具有重要意义。

因此，为治疗和诊断目的研究和开发在肝癌中高表达的基因和/或蛋白具有重要意义。本领域迫切需要新的在肝癌中高表达的基因和/或蛋白。

蛋白质二硫键异构酶A3(Protein disulfide-isomerase A3)，又成内质网蛋白57(Endoplasmic Reticulum protein 57)的Genebank登录号为gi|2507461|，NCBI的登录号为P30101，Swissprot登录号为P30101，IPI号为：IPI00025252.1。目前的研究表明蛋白质二硫键异构酶A3是一种多定位的，多功能的蛋白质，它的定位除了最初研究发现的内质网外，还有研究发现它存在于细胞膜和细胞核；其功能也不仅仅局限于最初研究发现的二硫键异构酶活性，也有研究发现它具有细胞膜受体功能和DNA结合活性。

蛋白质二硫键异构酶A3目前最主要的功能还是最初发现的二硫键异构酶活性，它属于氧化还原酶类的蛋白质二硫键异构酶家族，在哺乳动物细胞内质网中催化蛋白质成熟过程中的非天然二硫键到天然二硫键转化。所谓天然与非天然二硫键是根据二硫键是否是在蛋白质活性状态下区分的，天然二硫键的形成促进蛋白质成熟而使其具有正常的活性。研究表明蛋白质二硫键异构酶A3是一种糖蛋白特异的二硫键异构酶，也是分泌蛋白质成熟过程中内质网质量控制的关键因子。哺乳动物细胞内质网内有至少17种二硫键异构酶，他们对其底物的识别是通过决定底物特异性的B结构域进行的。

蛋白质二硫键异构酶A3的这种功能与癌症有一定联系。癌症造成的基因组不稳定性或者低氧微环境通常会引起大量蛋白质不能正常成熟积累在内质网造成内质网压力，进而造成细胞调亡，但是癌细胞本身又可以获得或者增强其缓解内质网压力的能力，从而保证其存活，癌症这种自我平衡可能成为新的治疗靶点。

也有文献表明，蛋白质二硫键异构酶A3在细胞核里也有分布。他的C末端区域含有一个A结构域，具有DNA结合活性，研究发现它是STATA3信号通路种的关键因子

又有文献表明它同时是一种膜受体，介导类固醇类激素膜起始的信号通路，研究发现它有两个硫氧还蛋白结构域，可以促进二聚化和配体结合。

到目前为止，还没有蛋白质二硫键异构酶A3与肝细胞癌有关的报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种蛋白质二硫键异构酶A3及其抗体在检测肝癌中的应用，以解决现有技术中的缺陷。

本发明的原理为：通过筛选在肝细胞癌癌组织以及肝细胞癌癌旁组织中差异表达的蛋白质，申请人找到了一种在肝细胞癌的癌组织和癌旁组织中存在差异表达的蛋白质(在癌组织中上调表达)，经质谱鉴定为蛋白质二硫键异构酶A3。用非酶解样品制备法(nonenzymatic samplepreparation，NESP)制备的肝细胞癌的癌组织与癌旁组织蛋白质样品，以掺入C13标记的亮氨酸的HepG2和L02细胞系样品的混合物为内标，通过常规凝胶电泳技术，结合串连质谱技术筛选并鉴定差异表达蛋白质，结果发现蛋白质二硫键异构酶A3在肝细胞癌癌组织中上调表达。免疫印迹实验进一步证实蛋白质二硫键异构酶A3的确在肝细胞癌的癌组织与癌旁组织中存在差异表达。

基于蛋白质二硫键异构酶A3与肝细胞癌的这种相关性，本发明首先提供了蛋白质二硫键异构酶A3在检测肝癌和/或肝癌易感性中的应用。如果蛋白质二硫键异构酶A3在待检肝细胞中呈上调表达，则提示该待检肝细胞为肝癌细胞。