[发明专利]高速逆流色谱制备红霉素A、红霉素B、红霉素C的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种从红霉素原料中制备高纯度红霉素A、红霉素B、红霉素C的方法，特别是涉及一种采用高速逆流色谱制备高纯度红霉素A、红霉素B、红霉素C的方法。

背景技术

红霉素(Erythromycin，简称EM)是一种大环内酯类广谱抗生素。目前已知其中有六种异构体，分别为红霉素A，B，C，D，E和F，A为主要活性成分。红霉素B和红霉素C的理化性质及抗菌谱与红霉素A相似，但它们的抗菌活性一般只有红霉素A的30％～60％。因此，目前医疗上用的大部分是红霉素A。

高纯度的红霉素组分的样品对于各种有关红霉素的研究工作都有着十分重要的意义。

红霉素A与红霉素B、红霉素C的性质相似，一般的分离手段很难将其分离开来。高速逆流色谱(High Speed Counter Current Chromatography，HSCCC)是1980年推出的一种无需固体支撑物的高效液液分配色谱分离技术，以其高回收率、高制备能力和高富集能力成功地运用于生物化学、生物工程、医学、药学、天然产物化学、有机合成、化工、环境、农业、材料等领域。高速逆流色谱技术温和而有效的分离使得其在分离抗生素的领域得到了广泛的应用，尤其在制备抗生素标准品方面显得很有潜力。

在采用高速逆流色谱分离制备红霉素组分的研究工作中，Booth等人采用高速逆流色谱在溶剂系统为：正己烷∶乙酸乙酯∶甲醇∶水＝1.4∶2.0∶2.0∶1.0，理论塔板数不高于1219的情况下分离制备红霉素A，得到了纯度在97％以上的红霉素A^{[1]，[2]，[3]}。([1]A.J.Booth，G.J.Lye.Optimization of the fractionation and recovery ofpolyketide antibiotics by countercurrent chromatography.J.Liq.Chromatogr.Rel.Technol.，2001，24(11&12)：1841-1861

[2]A.J.Booth，I.A.Sutherland，G.J.Lye.Modeling the performance of pilot-scalecountercurrent chromatography：Scale-up predictions and experimental verificationof erythromycin separation.Biotechnology and Bioengineering，2003，81(6)：640-649

[3]A.J.Booth，S.H.Ngiam，G.J.Lye.Antibiotic purification from fermentation brothsby counter-current chromatography：analysis of product purity and yield trade-offs.Bioprocess and Biosystems Engineering，2004，27：51-61)。

而目前尚未见采用高速逆流色谱分离制备高纯度红霉素B、C的研究报道，国内也尚未有高纯度的红霉素B和红霉素C样品提供。

发明内容

本发明的目的是提供一种从红霉素原料中制备高纯度红霉素A、红霉素B和红霉素C的方法。本方法可以同时或分别制备红霉素A、红霉素B和红霉素C。

本发明采取以下的技术方案：一种采用高速逆流色谱制备高纯度红霉素A、红霉素B、红霉素C的方法，包括：由正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水配制构成固定相、流动相的溶剂体系，上相为固定相，下相为流动相，使逆流色谱仪整个柱体中充满固定相，再将流动相泵入柱内；将含有红霉素组分A、B、C的红霉素原料溶于下相溶剂中，由进样阀进样，根据检测器的紫外谱图分别接收目标组分红霉素A、红霉素B、红霉素C，并进行冷冻干燥，其特征在于，所述的溶剂体系中正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水的用量体积比为0.5～1.3∶0.5～2.0∶0.5～2.0∶1。

其中，所说的红霉素原料为岳阳同联药业有限公司生产的红霉素碱，生产批号为20060710。

在上述溶剂体系中，所述的溶剂体系中正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水的用量体积比为0.6～1.2∶1.0～2.0∶0.8～1.6∶1时，得到的红霉素A的纯度高达90％～100％；