[发明专利]一种检测肥胖症遗传易感性的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学和医学领域，更具体的，本发明涉及一种检测肥胖症遗传易感性的试剂盒，通过同时检测与肥胖症遗传易感性密切相关的编码G蛋白β3亚单位(G Protein beta polypeptide 3，GNB3)和β2-肾上腺素能受体基因(β2 adrenergic receptor，β2-AR、ADRB2)的两种基因上的单核苷酸多态性位点基因型来评估肥胖症遗传易感性。

背景技术

肥胖症是一种与遗传因素及生活方式密切相关的慢性疾病，它会引发血脂升高，容易造成脂肪肝、动脉血管病变、心脏病、糖尿病，肥胖的儿童还会引发性功能发育不良等等。这不仅在儿童期对健康构成严重的威胁，而且是导致成人期各种疾病发病率和死亡率上升的重要原因。其中儿童肥胖及相关慢性病不仅严重威胁儿童的健康水平，同时也是影响未来人口质量、制约社会经济可持续发展的重要因素。因此，若通过有效的方法来预防，就能避免过早地出现高血压、冠心病、糖尿病、脑血管病等疾患，从而提高人们的生存质量。

肥胖症的发生是机体能量代谢失调的结果，其确切的发病机制尚未完全明了，目前认为除与环境因子及生活习惯有关外，肥胖症还与遗传、中枢神经系统异常、内分泌功能紊乱、代谢因素和营养因素不平衡等有关，人们早就注意到肥胖症的家族倾向和有较强的遗传背景，但未能确定其遗传方式。有关肥胖症的分子遗传学研究，始于对因单个基因突变引起的啮齿动物遗传性肥胖模型的了解，野生型C57BL/6J小鼠因基因自发突变而引起极度肥胖表现型，并可遗传给下一代，显示突变点与某些有调节体重作用的遗传物质有关。

至今为止至少已通过分子遗传学手段检出了250个人类基因或染色体区域并被报道与肥胖症相关。此外，遗传学和分子流行病学的证据均表明遗传因子涉及决定在特定饮食或用药情况下增加或损失脂肪的易感性，以及在肥胖者中发生其它相关疾病的高危险性。目前，经证实并且机理研究清楚的已知编码G蛋白β3亚单位(G Protein beta polypeptide 3，GNB3)和β2-肾上腺素能受体基因(β2 adrenergicreceptor，β2-AR、ADRB2)的两种基因与肥胖症患者的减重体质有密切关系。

发明内容

基于GNB3基因上的rs5443号SNP位点和ADRB2基因上的rs1042714号SNP位点多态性可用来评估肥胖症遗传易感性的基础上，本发明提供一种检测肥胖症遗传易感性的试剂盒。

该试剂盒包括：

检测GNB3基因上的rs5443号SNP多态性基因型的特异性引物对及特异性荧光探针对；

检测ADRB2基因上的rs1042714号SNP多态性基因型的特异性引物对及特异性荧光探针对；

荧光定量PCR反应组件(包括Taq酶、dNTP混合液、MgCl₂溶液、反应缓冲液、去离子水等)。

本试剂盒中所述的特异性引物对是指针对GNB3基因上的rs5443号SNP位点、ADRB2基因上的rs1042714号SNP位点而设计，能特异性扩增出包含这2个SNPs位点的DNA片段的引物对。设计这类引物对是本领域技术人员能够轻易完成的。优选地，试剂盒中包含具有SEQ ID NO：1和2、3和4所示序列的引物对。特异性引物对可用常规的合成技术进行合成。本领域的技术人员能够理解，本发明的引物不限于这两对引物。

本试剂盒中所述的特异性荧光探针对是指针对GNB3基因上的rs5443号SNP位点、ADRB2基因上的rs1042714号SNP位点而设计，能通过荧光定量PCR技术特异性检测出这2个SNPs位点基因型的Taqman探针对。设计这类探针是本领域技术人员能够轻易完成的。优选地，试剂盒中包含具有SEQ ID NO：5和6、7和8所示序列的Taqman探针对。特异性荧光探针对可用常规的探针合成技术进行合成。本领域的技术人员能够理解，本发明的特异性荧光Taqman探针对不限于这两对探针，所有可用于荧光定量PCR法检测本发明中所述用来评估肥胖症遗传易感性的2个SNPs位点的探针均在本发明范围内。

本发明试剂盒的组分和含量包括：

2μl 10X荧光定量PCR反应缓冲液，

0.2μl 25mM dNTP混合液，

1.2μl 25mM MgCl₂溶液，

0.05μl(5units/μl)Taq DNA聚合酶，

20μM特异性引物对每条引物各0.225μl，

10μM特异性荧光探针对每条探针各0.25μl，

去离子水10.65μl。