[发明专利]硝酸甘油用药评估试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学和医学领域，更具体的，本发明涉及一种检测个体对硝酸甘油药物敏感性的试剂盒。

背景技术

硝酸甘油(GTN，glyceryl trinitrate，nitroglycerin)用于治疗心绞痛和心力衰竭已有130年的历史，舌下含服硝酸甘油片是抗冠心病心绞痛急性发作的常规首选药方，但其临床有效性常因人而异。有的人因它而及时挽救了生命，而有的人服用之后，效果却不甚明显。以往国内外医学界一直认为硝酸甘油对部分病人疗效不佳是因其“耐药性”所致，但研究结果证实并非如此。近来的研究表明基因突变是影响硝酸甘油药物疗效的决定性因素。

ALDH2基因是线粒体ALDH的主要编码基因，定位于12号染色体。ALDH2具有脱氢酶活性，对人体内乙醛的氧化发挥主要的作用(即与体内代谢酒精的能力直接相关)，我们饮酒后产生的乙醛主要是由ALDH2参与氧化代谢的。除了上述的脱氢酶活性以外，ALDH2还有酯酶活性，可以催化硝酸甘油水解产生1，2—二硝基甘油和亚硝酸盐。

最新的研究成果表明，ALDH2基因第12个外显子存在一个G/A多态，即504位的谷氨酸被赖氨酸替代(Glu504Lys)会影响其酶活性。因此，人体内线粒体乙醛脱氢酶2(ALDH2)是硝酸甘油的有效代谢一氧化氮形成的关键。如果病人体内的线粒体乙醛脱氢酶2的基因Lys-504发生突变，就会影响线粒体乙醛脱氢酶2的酯酶活性，使硝酸甘油在体内的生物转化过程受阻，致一氧化氮减少甚至无法产生一氧化氮，也就难以有效发挥作用。

值得注意的是，在亚洲人群中，30％-50％的人都携有Lys-504基因突变，远远高于欧美人群。研究还发现，中国汉族人群中，含服硝酸甘油无效的比例高达25％以上。

因此，在中国人群中对需要含服硝酸甘油药物的病人进行ALDH2基因的SNP检测，能提前预知硝酸甘油药物对病人是否有效，就能提前做好准备。

发明内容

根据国家生物基因检测技术应用评估认证中心颁布的《中国人口健康服务基因位点认证规程》，对与硝酸甘油药物敏感性相关基因位点的支持文献、分子生物学机理研究、中国人群适用性等进行综合分析评估后，ALDH2基因上rs671号SNP位点通过国家生物基因检测技术应用评估认证中心认定，可用于检测评估硝酸甘油药物敏感性。

基于ALDH2基因上rs671号SNP位点的多态性可用来评估个体对硝酸甘油药物敏感性的基础上，本发明提供一种检测个体对硝酸甘油药物敏感性的试剂盒。

该试剂盒包括：

检测ALDH2基因上rs671号SNP多态性基因型的特异性引物对及特异性荧光探针对。所述的特异性引物对是指针对ALDH2基因上rs671号SNP而设计，能特异性扩增出包含这个SNP位点DNA片段的引物对。设计这类引物对是本领域技术人员能够轻易完成的。特异性引物对可用常规的合成技术进行合成。所述的特异性荧光探针对是指针对ALDH2基因上rs671号SNP而设计，能通过荧光定量PCR技术特异性检测出这个SNP位点基因型的Taqman探针对。设计这类探针是本领域技术人员能够轻易完成的。

荧光定量PCR反应组件(包括Taq酶、dNTP混合液、MgCl₂溶液、荧光定量PCR反应缓冲液、去离子水等)。

本发明试剂盒的组分和含量包括：

荧光定量PCR反应套装

10 X荧光定量PCR反应缓冲液1μl，

25mM dNTP混合液0.1μl，

25mM MgCl2溶液0.6μl，

5units/μl Taq DNA聚合酶0.025μl，

20μM特异性引物对每条引物各0.225μl，

10μM特异性荧光探针对每条探针各0.25μl，

去离子水5.325μl。

本试剂盒供一人份检测应用，试剂盒的保存温度为-20℃。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照厂商所建议的条件。

实施例1.检测试剂盒的使用

步骤1：DNA模板的抽取

用硅胶吸附法抽提口腔上皮细胞的基因组DNA。

步骤2：荧光定量PCR反应