[发明专利]一种血清小分子代谢产物的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及分析化学和医学领域，是一种血清小分子代谢产物检测方法。

背景技术

气相色谱质谱联用系统(Gas chromatography/Mass spectrometry，GC/MS)最早发明于上世纪六十年代，结合了气相色谱仪的高效分离能力与质谱仪的快速、高灵敏度检测、高鉴别分子结构的能力，迄今已经是一项非常成熟和稳定的化学分析技术。其工作的原理是多组分混合物样品经过色谱柱分离(可以通过化学衍生化的方法使混合物更容易分离)，得到各个单一组分，按保留时间顺序随同载气逐一进入质谱仪的离子源，单组分样品被电离成碎片(离子)，经质量分析器和检测器检测，可给出单一组分的质谱图，根据对所得质谱图进行计算机检索的结果，对这些单一组分进行定性、定量分析。仪器检测物质的质量范围广，测定质量范围为质荷比(m/z)10～900。物质衍生化后分子量增加也可被充分测定。

当今，气相色谱质谱联用仪已经普遍应用于环保、食品、石油化工、轻工、农药等各个领域中，在医学领域，主要用于医药、法医、毒品和兴奋剂的检测分析，在人体代谢组学领域的应用也日趋广泛。我国上海交通大学、北京大学都应用了该项技术对动物疾病模型的血液或尿液进行代谢组学的研究。国外有人成功地探讨了如何对人体血清用化学衍生化气相色谱质谱联用检测血清中的小分子代谢产物，进行代谢组学研究。我国浙江大学利用该技术进行了肝衰竭病人的血清代谢组学研究。

但是，目前尚无采用气相色谱质谱联用系统检测肝癌患者血清特异小分子代谢峰的报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种操作方便、敏感性好、准确度高的血清小分子代谢产物检测方法。

本发明提供了一种血清小分子代谢产物的检测方法，该方法包括以下步骤：

(1)对血清样本进行蛋白沉淀和小分子代谢产物的萃取；

(2)对萃取物进行衍生化；

(3)用气相色谱质谱联用系统对上述衍生化产物进行分离和鉴定，获得各小分子代谢产物图谱；

(4)计算各小分子代谢产物指纹图谱的峰面积数据，并用判别方程检测结果。

本发明中，(2)中采用甲氧胺吡啶溶液和N-甲基-N-(三甲基硅烷)三氟乙酰胺含1％三甲基氯硅烷(N-甲基-N-(三甲基硅烷)三氟乙酰胺含1％三甲基氯硅烷，是德国sigma公司生产的衍生化试剂，买来的成品就是混合物，其中二者的体积比99∶1)这二种衍生化试剂依次进行二步衍生化。

本发明中，将图谱峰面积按判别方程相加得到Z1和Z2的值；Z1的判别方程式为Z1＝-67.60609+152.91327*峰84-19.26355*峰31-35.97298*峰76+58.68575*峰18-2.68238*峰30-114.53660*峰14+31.99892*峰28-67.37426*峰81+22.88033*峰62-19.31615*峰43+122.83181*峰4-82.09541*峰87-57.71720*峰2+38.14089*峰22-7.57512*峰91；Z2＝-6.07158+32.34580*峰84-3.52482*峰31-4.80436*峰76+9.69755*峰18-0.56240*峰30-16.88349*峰14+5.01229*峰28-5.98591*峰81+3.84596*峰62-2.06431*峰43+16.92177*峰4-11.38467*峰87-5.45394*峰2+5.14309*峰22-2.09113*峰91；其中，峰84、峰31、峰76、峰18、峰30、峰14、峰28、峰81、峰62、峰43、峰4、峰87、峰2、峰22、峰91分别代表各图谱峰的峰面积，峰后面的数字代表该峰的出峰序号。“*”表示乘法。

本发明中，色质谱条件为：进样口温度200-300℃，柱箱起始温度：40-100℃，以1-20℃/min升至300℃，保持5-20min；惰性气体作为载气，流速0.5-5.0ml/min；四级杆温度120-180℃，离子源温度200-280℃；溶剂切除时间0-5min。

本发明中，所述惰性气体可以是氦气。

另一方面，本发明提供了上述方法在鉴别小分子代谢产物变异中的应用。

本发明还提供了上述方法在鉴别肝癌患者中的应用。

本发明中，Z1值小于Z2值者为肝癌患者的代谢检测结果。

本发明中，小分子代谢产物与保留时间、图谱峰对应关系如下：