[发明专利]人类Toll样受体7基因单核苷酸多态性及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明涉及一种人类Toll样受体7基因单核苷酸多态性及其在诊断和治疗系统性红斑狼疮中的应用。

背景技术

系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，SLE)被认为是自身免疫病的原型，以产生大量针对核抗原的自身抗体为显著特点。近年来的研究发现IFN-α在SLE中起着重要作用。对狼疮动物模型的研究发现多个狼疮候选基因位点为干扰素诱导相关基因，当狼疮小鼠NZB与IFN受体基因敲除小鼠杂交后，其子代(IFN受体缺陷)，病情明显减轻，生存期延长，而具有狼疮背景NZB x NZW/F1小鼠在其体内注射IFN-α后，病情明显加重，生存期缩短(Santiago-Raber，et al.J Exp Med 2003，197：777-788)。SLE患者血清中IFN-α水平明显增高，而且一些本身不伴有自身免疫疾病的患者如恶性肿瘤或病毒感染的患者多次注射IFN-α后可产生抗核抗体(ANA)，甚至诱发SLE症状(Han，G.M.，et al.Genes Immun，2003，4：177-186)。基因水平的研究表明SLE患者的外周血单个核细胞基因表达谱存在一特征：一组干扰素调节基因(OAS1，IFIT3，IFIT1，Ly6e等)表达异常升高(Diebold，etal.Science，2004，303：1529-1531)。这些结果均表明干扰素通路异常激活是SLE一个主要的分子表型。由细胞表面或细胞内受体识别病毒、细菌或原虫的DNA，RNA是引起IFN-α分泌的关键诱导因素，其中Toll样受体(TLRs)发挥了重要作用。人的浆细胞样树突状细胞(pDC)是分泌I型干扰素的主要细胞，表达TLR7受体。TLR7能够识别单链RNA，并可触发一系列信号分子激活树突状细胞产生IFN-α。以TLR7配体刺激人的pDC发现，产生的IFN-α水平女性高于男性，且此IFN-α水平的性别偏差与X染色体的失活或雌激素的影响无关。另有研究发现，TLR7缺陷型狼疮鼠的疾病表型得到改善，血清中IgG降低(Christensenet al.Immunity，2006，25：417-4280)。这些结果均提示TLR7基因在SLE患者中尤其在女性患者中可能起作用。因此，研究TLR7基因内部的单核苷酸多态性位点(SNPs)与SLE的关系具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供人类TLR7基因及其单核苷酸多态性(SNP)与系统性红斑狼疮的相关性，及其在检测系统性红斑狼疮易感性方面的用途。

本发明提供了一种检测人类TLR7基因的单核苷酸多态性的方法，包括步骤：

a、确定TLR7基因3’UTR区域距离终止密码子880bp处的核苷酸；

b、检测在所述位置是否存在单核苷酸多态性。

所述单核苷酸多态性是在3’UTR区域距离终止密码子880bp处的核苷酸存在C→G的多态性，即在对应于SEQ ID NO：1所示的序列第97位存在C→G的多态性。

本发明还提供了一种分离核酸，它具有SEQ ID NO：1所示的序列，该序列的第97位为G。

本发明还提供了一组等位基因特异性的核酸引物，该引物序列如SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示，且特异性地扩增出含TLR7基因3’UTR区域的SEQ ID NO：1所示序列中第97位单核苷酸多态性的扩增产物。

本发明还提供了一种用于检测系统性红斑狼疮易感性的方法，该方法为抽提被测者的基因组DNA，检测被测者的TLR7基因3’UTR区域的SEQ ID NO：1所示序列中第97位单核苷酸多态性位点的等位基因，检测该被测者对系统性红斑狼疮的易感性；若被测者为女性且第97位等位基因为G，该被测者对系统性红斑狼疮的易感性较高。

本发明还提供了一种用于检测系统性红斑狼疮易感性的方法，该方法为抽提被测者的基因组DNA，检测被测者的TLR7基因3’UTR区域的SEQ ID NO：1所示序列中第97位单核苷酸多态性位点的基因型，检测该被测者对系统性红斑狼疮的易感性；若被测者为女性且第97位基因型为G/G，该被测者对系统性红斑狼疮的易感性较高；若被测者为女性且第97位基因型为C/G，该被测者对系统性红斑狼疮的易感性比G/G型低，但比C/C型高；若被测者为女性且第97位基因型为C/C，该被测者对系统性红斑狼疮的易感性较低。

本发明还提供了一种系统性红斑狼疮的诊断试剂盒，包括：

a、特异性扩增TLR7基因的引物对，其中所述引物对具有SEQ ID NO：2和3所示的序列；