[发明专利]一种抗高血压活性三肽及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物活性肽领域，特别涉及一种通过水解酪蛋白得到的抗高 血压活性三肽及其制备方法和应用。

背景技术

动物乳，常见的如牛乳是一种成分复杂的生物流体，其中蛋白质含量为 32g/L，主要由酪蛋白和乳清蛋白组成，而酪蛋白大约占80％(26g/L)，是 含磷的几种蛋白质的复合体，以胶体形式存在于牛乳中。牛乳蛋白质在营养 上是优质的全价蛋白质，蕴藏着多种生物活性肽片段，在生理上有许多作用。

目前文献报道的大部分所谓的降血压肽产品为ACE抑制物(ACEI)， 但没有经过动物实验的验证环节，很难确定为是真正的抗高血压活性肽产 品。例如1982年，Maruyama等(Maruyama S.，Suzuki H.A peptide inhibitor of angiotensin I converting enzyme in the tryptic hydrolysate of casein.Agric. Biol.Chem.1982，46：1393-1399.)采用胰蛋白酶水解酪蛋白，首次从酪蛋白中 获得了具有抑制ACE活性的三种肽Pro-Pro、Ala-Pro、Ala-Hyp；而有些具 有降血压功能的活性肽是经过酪蛋白发酵产生，而不是通过酶解作用产生， 例如用L.helveticus和S.cerevisiae发酵得到的酸奶，以5mL/kg(体重)的 剂量饲喂SHR，可在6～8h内明显地降低其心脏收缩压(Maeno M，Yamamoto N，Takano T.Identification of an antihypertensive peptide from casein hydrolysate produced by a proteinase from Lactobacillus helveticus CP 790.J Dairy Sci.1996，79：1316-1321.)。

本申请人在专利申请号为200710042207.5的中国专利申请中公开了一 种从酪蛋白中生产具有抗高血压功能的活性肽的方法，其选用0.072AU/g酪 蛋白的碱性蛋白酶Alcalase，在55℃～60℃，pH在8.4～8.6范围，酶解酪蛋 白水溶液5～6小时左右，再采用大孔树脂DA201-C、70％的乙醇为洗脱液对 水解物进行脱盐处理得到纯化的酪蛋白水解活性肽，该活性肽为多种肽的混 合物，具有良好的抑制ACE功能和降血压功能。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种抗高血压活性三肽及其制备方法。 该活性三肽从上述酪蛋白的Alcalase酶水解活性肽中进一步分离得到，其具 有更佳的抑制ACE功能和降血压功能。

本发明人在上述CN 200710042207.5的技术基础上，进一步研究发现， 从通过Alcalase酶水解的酪蛋白活性肽中可以分离出一种活性三肽，在较小 剂量下即具有良好的抑制ACE功能和降血压功能，并通过结构检测分析得 到活性肽的序列。

本发明的一种抗高血压活性三肽，其氨基酸序列为：Asn-Pro-Trp，用单 字母表示为N-P-W，即由天冬氨酸-脯氨酸-色氨酸3个氨基酸残基组成。

本发明制备上述抗高血压活性三肽的方法，包括将酪蛋白的Alcalase酶 水解活性肽进一步通过体积排阻色谱方法进行分离，其中所述的体积排阻色 谱参数如下：色谱柱为Sephadex G-15 1.6×100cm，检测波长为220nm，样 品浓度为10mg/ml，进样量为15ml，洗脱液为pH3.6、0.02moL/L的醋酸缓 冲液，流速为42ml/h；分离到峰I～VI共6个峰，收集峰V组分。

较佳地，该收集的组分还进一步经HPLC纯化，其中色谱柱：μBondapak C₁₈ 19×300mm I.D.，检测波长：220nm或280nm，进样量：2mL，流速： 20mL/min，洗脱条件：0min～20min 100％～75％A、0～25％B，20min～50min 75％～50％A、25％～50％B，A为0.1％TFA水溶液，B为含0.1％TFA、体 积比为1∶1的乙腈和水组成的有机相，所述的百分比均为体积百分比(v/v)。

根据本发明，所说的酪蛋白的Alcalase酶水解活性肽即为参照上述本申 请人CN 200710042207.5的专利文献公开的方法制得的多种肽的混合物。