[发明专利]小鼠S180肝癌动物模型的建立方法

说明书

技术领域：

本发明涉及疾病的动物模型，具体地说是小白鼠肝癌动物模型的建立方法。

背景技术：

当前，肝癌动物模型有诱发性肝癌模型、移植性肝癌模型及转基因动物肝癌模型。①自发性肝癌动物模型多选用近交系小鼠，由于实验动物种属、品系的不同，肿瘤发生类型和发病率有很大差异，造模有一定的困难。②诱发性肝癌动物模型多选用敏感性高的纯系大鼠。该模型特点为起病隐匿、病程较长，肿瘤多为弥漫结节型，诱导周期长，在诱癌过程中动物的死亡率相对较高。③转基因动物肝癌模型多用CD1、C57BL/6×DBA、C57BL/6×SJL等品系小鼠。但因制作技术要求极高，价格昂贵，国内开展的尚较少。上述肝癌动物模型不是理想的肝癌研究模型。

人类肿瘤转移模型的原位种植或/移植是目前公认的研究中药及其有效成分对人类癌肿生长、侵袭和转移等机制研究不可缺少的主要手段。目前有关人肿瘤转移模型大多是用裸大鼠、裸小鼠，但技术要求高，且饲养困难、价格昂贵。动物肿瘤则多数是用Wistar或SD大鼠建立的。小鼠经济、易于饲养、易获得，是医学和生物学研究的非常理想的实验动物。目前，小鼠广泛应用于镇静、镇痛、抗炎、糖尿病、抗肿瘤等方面的研究。在抗肿瘤研究方面，小鼠常用作腹水癌和皮下实体瘤的动物模型，也有用H₂₂肝癌细胞接种小鼠肝脏制作BAL B/c小鼠肝癌模型的报道，但该模型未能切实应用于肝癌研究。当前，国内外均未见应用S₁₈₀细胞株建立小白鼠肝癌模型的相关报道。

发明内容：

本发明的目的是公开一种简便易于复制，且周期短，成功率高的小白鼠肝癌动物模型及建立方法。

本发明目的通过如下技术方案来实现：

建立小鼠肝癌模型的方法包括如下步骤：

①运用S₁₈₀细胞接种于昆明种(KM)小鼠腹腔，建立KM小鼠S₁₈₀腹水癌动物模型；

②无菌抽取S₁₈₀腹水癌小鼠的腹水，离心，弃上清，用灭菌的生理盐水洗2次；

③用生理盐水制成5.0×10⁶～5.0×10⁷细胞/ml的细胞悬液；

④每只0.05～0.2ml，种植于KM小鼠肝脏，3～4天后即见到种植肝叶变成肿瘤，灰白色，与肝组织间界线模糊的肝癌肿块。可累及邻近肝叶。该小鼠平均寿命为1～2周。或将细胞接种于KM小鼠皮下，制成小鼠皮下肉瘤模型。

⑤无菌取出上述肝肿瘤小鼠的肿瘤肝叶或皮下肉瘤，切成1～2mm×1～2mm的小块，打开受试小鼠腹腔，种植于肝脏，1周后即可出现黄豆粒大小(直径为0.5mm～0.9mm)的与正常肝组织界限清晰的肝肿块。

本发明的优点在于：

应用移植法制作小鼠肝癌，周期短，成本低，可使实验动物均带有同样的肿瘤，其生长速度也较为一致，个体差异较小，成功率高达95％以上。较异位移植模型能够更好地模仿人肝癌在体内的血供和生长环境，未发现自发性消退，适用于对肝癌的实验性治疗及侵袭与转移等机制方面的研究。

具体实施方式：

先运用S₁₈₀细胞接种于昆明种(KM)小鼠腹腔，建立KM小鼠S₁₈₀腹水癌动物模型，然后无菌抽取S₁₈₀腹水癌小鼠的腹水，离心，5分钟，每分钟1000转，后弃上清，用灭菌的生理盐水洗2次，再用生理盐水制成5.0×10⁶细胞/ml的细胞悬液，种植于小鼠肝脏，0.1ml/只，1～2周后即见到种植肝叶变成肿瘤，灰白色，与肝组织间界线模糊的肝癌肿块。可累及邻近肝叶。或将细胞接种于KM小鼠皮下，制成小鼠皮下肉瘤模型。无菌取出上述小鼠肿瘤肝叶或皮下肉瘤，切成1～2mm×1～2mm的小块，打开受试小鼠腹腔，种植于肝脏。1周后出现黄豆粒大小(直径为0.5cm～0.9cm)的与正常肝组织界限清晰的肝肿块。

实验表明，小鼠原位移植性肝癌模型是一种较好的肿瘤动物实验模型。该模型具有简便而易于复制、周期短、成功率高等特点，是一种理想的肝癌动物模型。