[发明专利]从银杏叶中提取分离银杏内酯B的方法

说明书

(一)技术领域：

本发明涉及从植物中提取有效成份的方法，具体涉及从银杏叶中提取分离银杏内酯B的方法。

(二)背景技术：

银杏树又称白果树，属裸子植物，是银杏科银杏属的唯一生存的老树种之一，其叶和果具有重要的药用价值。目前研究最多的是银杏叶提取物，它包括黄酮类化合物和银杏内酯类化合物。黄酮类化合物约有38种，总含量为22-27％；银杏内酯类化合物包括银杏内酯和白果内酯，总含量为5.4-6.6％。银杏内酯主要包括银杏内酯A、B、C、J和M单体；据文献报道，银杏内酯中各单体的药物功能有一定差异，其中，银杏内酯A、B对治疗心脑血管疾病具有显著疗效，而白果内酯对治疗神经系统疾病则药效独特，为了提高其药用治疗效果，有时必须将各单体分离纯化；由于白果内酯是倍半萜物质，而银杏内酯A、B、C、J、M是二萜类物质，它们的分子结构较为相似，极性差异也很小，致使银杏内酯中的各单体的提取与分离比较困难。现有的银杏内酯B的提取方法有很多种，如微波提取法、溶液提取法等，例如申请号为200510063407.X，名称为《一种从银杏叶或银杏叶提取物中提取银杏内酯B的新方法》的中国发明专利，公开了一种银杏叶或银杏叶提取物中提取银杏内酯B的方法，该提取方法步骤为：1)取银杏叶或银杏叶提取物加水煮沸，冷藏，取上清液过滤，得滤液；2)滤液用正丁醇或与正丁醇相似溶解度或极性的溶剂进行萃取，分出水层；3)回收萃取液中的溶剂，干燥，得干燥物；4)干燥物中加入乙醇煮沸使其溶解，冷藏，抽滤，洗涤得晶体；5)晶体中加入乙醇使其溶解，冷藏，抽滤，得银杏内酯B单体；6)银杏内酯B单体经真空干燥得到纯度达90％以上的银杏内酯B单体。

(三)发明内容：

本发明将公开一种提取所得率高、纯度高的从银杏叶中提取分离银杏内酯B的方法。

本发明从银杏叶中提取分离银杏内酯B的方法，其步骤如下：

1)取银杏叶，用由高到低不同浓度的乙醇进行提取，合并提取液，回收乙醇，得到浓缩后的提取液；

称取一定量的银杏叶，可先用体积浓度为60-80％的乙醇在50-70℃时对银杏叶提取1-3个小时，其中，银杏叶与乙醇的配比按银杏叶的重量∶乙醇的体积＝1∶8-10；将银杏叶分离出来，再用体积浓度为30-55％的乙醇在50-70℃时对银杏叶提取1-3个小时，其中，银杏叶与乙醇的配比按银杏叶的重量∶乙醇的体积＝1∶6-8；再将银杏叶分离出来，用体积浓度为10-25％的乙醇在50-70℃时对银杏叶提取1-3个小时，其中，银杏叶与乙醇的配比按银杏叶的重量∶乙醇的体积＝1∶5-7；合并提取液，回收乙醇，将提取液浓缩至银杏叶重量的8-10倍体积；

2)向浓缩后的提取液中加入乙酸乙酯萃取，回收有机相后浓缩至浸膏；

可向浓缩液中加入等体积的乙酸乙酯萃取，一般来说，萃取3次所达到的效果较好；

3)将步骤2)所得浸膏稀释后上选择性极性无孔吸附树脂柱，用乙醇洗脱，所得洗脱液回收乙醇后，再用乙醇结晶得到银杏内酯类化合物；

所述选择性极性无孔吸附树脂柱的型号可为ADS-15，或ADS-17，或ADS-F8；将步骤2)所得浸膏用50-200倍于其重量的水稀释后上柱，可先用水洗，直至流出液无色；然后再用体积浓度为50-70％的乙醇洗脱，所述洗脱剂的体积用量可为上述浸膏重量的30-60倍；将收集得到的洗脱液回收乙醇，浓缩至浸膏，再用体积浓度为50-80％的乙醇为溶剂结晶，所得结晶即为银杏内酯类化合物；

4)将银杏内酯类化合物结晶上硅胶柱，用正己烷和乙酸乙酯的混合液洗脱，收集洗脱液，得到富集银杏内酯B的洗脱液；

所述正己烷和乙酸乙酯的混合液中正己烷和乙酸乙酯的体积比最好为9∶1-2∶8；在洗脱的过程中，以蒸发光散射检测器在线检测定位，待溶剂峰出完后的第三个峰处开始收集洗脱液，得到富集银杏内酯B的洗脱液；

5)回收步骤4)中收集的洗脱液中的溶剂，再用乙醇结晶，得到银杏内酯B。

回收步骤4)中收集的洗脱液中的溶剂，再用体积浓度为30-70％的乙醇对其结晶，所得结晶即为银杏内酯B单体。

本发明的优点：

本发明采用由高到低不同浓度的乙醇对银杏叶进行提取，使银杏内酯B单体的提取率提高了10％以上；本发明中还采用了特殊的选择性极性无孔吸附树脂进行除杂，可除掉大部分影响硅胶柱分离的杂质，实现了一次上柱即可分离得到银杏内酯B单体，且纯度达到99％以上；与现有技术相比，本发明提供的方法工艺简单、生产成本低，所得产品纯度高，更易于产业化的生产。

(四)具体实施方式：

实施例1